Содержание

Ответы на тест по знанию правил Воркзиллы (обновлено)

Вопросы и ответы в вашем случае могут быть в другом порядке, поэтому будьте внимательнее.

Как вы поступите, увидев в ленте новых заданий заказ по вашей специальности, но по явно заниженной цене?

  • Соглашусь на задание и договорюсь с заказчиком о повышении цены
  • Откажусь от задания
  • Соглашусь на задание и в случае назначения меня исполнителем выполню на соответствующем такой низкой цене уровню

Что произойдёт, если вы не выполните задание в срок?

  • Ваш аккаунт будет заблокирован
  • Задание будет передано в Арбитраж, и ваш рейтинг будет понижен
  • Заказчик будет ждать результата столько, сколько потребуется

Что произойдёт, если вы согласитесь на предложение Заказчика оплатить работу вне сервиса work-zilla.com?

  • Задание будет отправлено в Арбитраж
  • Ваш рейтинг будет понижен
  • Ваш аккаунт будет заблокирован

Задание стоимостью 100 было отправлено в арбитраж. Какая сумма будет зачислена на ваш счёт, если Арбитраж будет решён на 50 % в вашу пользу?

В каком случае ваш рейтинг уменьшится?

  • При получении нейтральной оценки
  • При получении негативной оценки
  • При получении нейтральной или негативной оценки

Вам нужно срочно отправить сообщение заказчику, а его нет онлайн. Ваши действия?

  • Отправлю задание в Арбитраж
  • Напишу сообщение в чате
  • Обращусь за помощью в службу поддержки, попрошу дать мне контакты заказчика

С какого момента вы можете быть уверены, что качественно выполненная вами работа будет оплачена?

  • С момента перехода задания в статус “В работе”
  • С момента внесения заказчиком предоплаты за работу
  • С момента попадания в кандидаты

Вы закончили работу, а заказчика нет онлайн. Ваши действия?

  • Нажму кнопку “Отправить на проверку”
  • Напишу заказчику в чате, что задание выполнено
  • Приступлю к новому заданию

Какой минимальный срок вывода средств из системы?

  • 3 дня
  • 24 часа
  • До 1 часа, если сообщить службе поддержки о необходимости срочного вывода средств

Время на выполнение задания — 15 дней. Задание перешло в работу 1 июня в 14:00. Работа была выполнена 13 июня в 09:00. Если Заказчик не подтвердил выполнение задания, когда вы сможете передать задание в Арбитраж?

  • 14 июня в 9:00
  • 14 июня в 21:00
  • 17 июня в 21:00

Что произойдёт, если вы разместите на сервисе work-zilla.com объявление о поиске работы?

  • Ваш аккаунт будет заблокирован
  • Заказчики прочитают ваше объявление, и вы получите много заказов
  • Вы получите предупреждение, и ваш рейтинг будет понижен

Время на выполнение задания 5 часов. Задание перешло в работу 1 июня в 14:00. Работа была выполнена 1 июня в 18:32. 2 июня в 19.00 вы отправили задание в Арбитраж. Арбитраж вернул задание в работу 2 июня в 19:10. Когда вы сможете обратиться в Арбитраж повторно, если заказчик не проверит вашу работу?

  • 2 июня в 19:10
  • 3 июня в 19:00
  • 3 июня в 19:10

Вы профессиональный веб-дизайнер. Что вы будете делать для получения задания?

  • Выберу в настройках профиля специализацию “Дизайн”
  • Размещу объявление с предложением своих услуг
  • Буду соглашаться на все задания и предлагать свои услуги

Что произойдет, если вы предложите заказчику оплатить работу вне сервиса work-zilla.com?

  • задание будет отправлено в Арбитраж
  • ваш рейтинг будет понижен
  • ваш аккаунт будет заблокирован

Как вы поступите, если после назначения вас исполнителем поймете, что объем работы гораздо больше, чем казалось вначале, и цена для такого задания слишком мала?

  • выполню работу до конца за указанную цену
  • объясню ситуацию заказчику и попрошу увеличить цену
  • откажусь выполнять работу

Какая сумма будет зачислена на ваш счет, если заказчик подтвердит выполнение задания стоимостью 100?

Когда следует приступать к выполнению задания?

  • сразу после подачи заявки на выполнение задания
  • после попадания в кандидаты
  • после перехода задания в статус “В работе”

Задание отправлено в Арбитраж. Арбитраж вернул его в работу. Как узнать причину возврата задания в работу?

  • написать в службу поддержки
  • причина будет указана в системном сообщении
  • причины возврата задания в работу не сообщаются

Что произойдет с вашим рейтингом если заказчик поставит вам нейтральную оценку за работу?

  • Рейтинг уменьшится
  • Рейтинг увеличится
  • Рейтинг не изменится

Что вы будете делать, если поймете, что не укладываетесь в сроки, отведенные на выполнение задания?

  • сообщу заказчику, к какому сроку смогу закончить работу
  • отправлю задание в Арбитраж с требованием оплатить часть работы
  • продолжу выполнять работу, ничего не сообщая заказчику, т. к. он не уточнил, что задание срочное

Время на выполнение задания – 5 часов. Задание перешло в работу 1 июня в 14:00. Работа была выполнена 1 июня в 18:32. Если Заказчик не подтвердил выполнение задания, когда вы сможете передать задание в Арбитраж?

  • 1 июня в 18:32
  • 2 июня в 18:32
  • 2 июня в 14:00

Заказчик предложил обменяться контактами до перевода задания в статус “В работе”. Ваши действия:

  • сообщу Заказчику, что обмен контактами до перевода задания в статус “В работе” запрещен
  • отправлю свои контакты
  • свяжусь с заказчиком по предоставленным им контактам

Вы подали заявку на вывод средств 1 января в 18:00. Когда перевод поступит на ваш кошелек?

  • 1 января в 18:00
  • В любое время, если обратиться в службу поддержки
  • 4 января в 18:00

Что вы будете делать, когда закончите выполнение работы?

  • нажму кнопку “Отправить на проверку”
  • напишу заказчику в чате, что задание выполнено
  • приступлю к новому заданию

Ответы на тесты Workzilla (обновлено)

Как пройти тест на знания правил Workzilla

У биржи фриланса Workzilla есть одна особенность – регистрация включает обязательное прохождение тестирования. Это два блока небольших тестов. Один из них совсем простой – на умение пользоваться интернетом. Второй требует некоторой подготовки – о знании правил сервиса. О том, как пройти тест на знания правил Workzilla, читайте в этой статье.

Первый тест состоит из четырех заданий. Вопросы несложные. Но у каждого пользователя они свои, поэтому правильные ответы списать невозможно. Ответы теста Workzilla легко найти в поисковике.

Текст первых двух заданий просто копируете в поисковую строку Яндекс или Гугл и ищете нужный ответ. Третье задание – на элементарные школьные правила русского языка. В последнем задании все предельно ясно – делайте так, как написано.

Перечень вопросов может быть разным у разных пользователей. Вот для примера мой вариант теста Workzilla:

Второй тест на правила Workzilla.

На сервисе действуют правила. Они являются основой эффективной работы сайта. Изучить и знать их важно каждому пользователю. Нарушение правил может привести к блокировке аккаунта.

Правила делятся на 3 блока:

Общие правила для всех. В этом разделе прописано:

• Перечень запрещенных заданий (противозаконные, наносящие вред третьим лицам, задания с оплатой вне сервиса, с обменом денежными средствами или указанием реквизитов).
• Запрет об использовании нескольких аккаунтов, чужого имени, накрутки рейтинга.
• Запрет на обмен контактами до перевода задания в статус «в работу».
• Запрет об оплате задания вне системы Work zilla.
• Предупреждение, что переписку лучше вести в чате сервиса. В случае спорных ситуаций она будет учтена.
• Сроки рассмотрения спорных вопросов.
• Соблюдение закона РФ, уважение друг к другу.
• При возникновении спорных ситуаций, некачественного выполнения задания.

Исполнителем или длительной проверки работы Заказчиком, можно обратиться в Арбитраж. Администраторы проанализируют ситуацию и вынесут решение.

Правила для Заказчиков:

• Запрещено указывать контактные данные в описании задания.
• Описание задания должно четко отражать требования. Если что-то не было прописано, то Исполнитель не обязан это выполнять.
• Нельзя требовать выполнения работы до окончания срока.
• После сдачи работы на проверку следует проверить ее в течение 24 часов.

Правила для Исполнителей:

• Необходимо соблюдать сроки.
• После выполнения работы нужно отправить ее Заказчику, и изменить статус на «Отправить на проверку».
• Запрещено требовать предоплату, просить изменить стоимость работы, навязывать услуги, не связанные с заданием.
• Принять к сведению информацию о комиссии сервиса (10% от стоимости задания) и о рейтинге.

Второй тест содержит 13 вопросов о правилах сервиса. Вопросы одинаковы для всех, может лишь меняться их последовательность. Часто этот тест стопорит дальнейшую регистрацию.

Важно! Для того чтобы вы смогли без труда ответить на вопросы, даю вам актуальные правильные ответы Workzilla 2020:

Эти ответы помогут пройти тест за несколько минут. Но прочитать правила все же необходимо. Они пригодятся вам в дальнейшей работе. Выделите 10 минут на ознакомление с ними.

Проходите регистрацию, отвечайте на вопросы и начинайте работу! Желаю удачи!

Шпаргалка для тестов WorkZilla (обновленно январь 2021 года)

При регистрации на сервисе для фрилансеров WorkZilla, вам потребуется пройти тестирование.
Здесь вы найдете ответы на все тесты.

Список вопросов и ответов

Вопрос: Сколько голов забил «Вест Окленд» в финале чемпионата в Италии в 1911?

Ответ: 6


Вопрос: В каком году была сформулирована теория — предшественница кислородной теории горения.

Ответ: 1703


Вопрос: Год первого исполнения прыжка, который считается самым сложным в фигурном катании?

Ответ: 1882


Вопрос: Спутник седьмой по удаленности от Солнца планеты, названный в честь гнома из поэмы Александра Поупа «Похищение локона»?

Ответ: Умбриэль


Вопрос: Атомный номер металла, который обеспечивает зеленый цвет малахита.

Ответ: 29


Вопрос: Атомный номер вещества, которое способны фиксировать бактерии Rhizobium.

Ответ: 7


Вопрос: Год венчания на царство первого русского царя.

Ответ: 1547


Вопрос: Атомный номер вещества, одной из форм которого является алмаз.

Ответ: 6


Вопрос: В каком году получил звание гроссмейстера победитель чемпионата мира по шахматам 2006 года.

Ответ: 1991


Вопрос: В каком году была открыта четвёртая по массе планета Солнечной системы?

Ответ: 1781


Вопрос: За сколько земных суток обращается вокруг Солнца планета, названная в честь древнеримского бога торговли?

Ответ: 88


Вопрос: Год рождения автора слов «Поелику в России считают Новый год по-разному, с сего числа перестать дурить головы людям и считать Новый год повсеместно с первого января”?

Ответ: 1672


Вопрос: Имя дедушки второй жены Генриха I Французского.

Ответ: Владимир


Вопрос: Какой вокзал в Москве с 1942 по 1946 год носил название в честь города, битве за который посвящено стихотворение со строками ”Этот месяц был страшен, Было все на кону”?

Ответ: Рижский


Вопрос: Металл с атомным номером 80 на эсперанто.

Ответ: Hidrargo


Вопрос: Латинское название металла, способного рассыпаться в порошок на сильном морозе.

Ответ: Stannum


Вопрос: Сколько очков получил в 53-й сезон семикратный чемпион Формулы-1?

Ответ: 144


Вопрос: Фамилия автора находки, в честь которой в Новгороде ежегодно 26 июля устраивают праздник.

Ответ: Акулова


Вопрос: Современное название города, в котором был заключен в 1807 году договор между Францией и Россией.

Ответ: Советск


Вопрос: Укажите официальный курс обмена 1 евро по отношению к российскому рублю, установленный ЦБ РФ на 16.04.2017 (формат 00.0000).

Ответ: Находим сайт, где указана история курсов валют. Например banki24.by

Указываем необходимую нам дату и переписываем в ответ верный курс. Обратите внимание на разделитель — это точка, а не запятая!


Вопрос: Перепишите предложение, исправив орфографические ошибки

Ответ: Вывод средств осуществляется через 72 часа с момента подачи заявки.


Вопрос: Пожалуйста, найдите ссылку “Правила” внизу любой страницы нашего сайта work-zilla.com, перейдите на нее, скопируйте адрес из адресной строки и добавьте в конце ссылки “/текущая дата по московскому времени(день_месяц_год)”. Например, для адреса верным ответом будет

Ответ: https://work-zilla.com/regulations/01_02_2019


Вопрос: Нахадясь в очереди, вы не можите абщатся с заказщиком.

Ответ: Находясь в очереди, вы не можете общаться с заказчиком.


Вопрос: Перепишите предложение, исправив ошибки: Если вы сагласились, значит, вы гатовы выполнить поручение за указаную суму.

Ответ: Если вы согласились, значит, вы готовы выполнить поручение за указанную сумму.

И да, если Вас интересует работа или стажировкавм в маркетинговом агентстве пишите в Телеграмм или на почту [email protected]

Ответы на тесты workzilla

Совсем недавно руководство сайта сменило вопросы тестов, чтобы усложнить регистрацию и избавиться от недобросовестных исполнителей и заказчиков. Так что настоятельно рекомендую изучите внимательно правила и следуйте им, а ответы ниже используйте просто как подсказку. От знания правил зависит ваша работа — нарушения ведут к бану! Правильные ответы помечены красным цветом. Но последовательность вопросов на сайте меняется, так что смотрите на формулировку. На первой странице нужно внимательно прочитать правила и поставить галочки, что вы ознакомились с информацией и со всем согласны. Придерживайтесь правил, чтобы не получить бан! Это очень важно. После этого нужно ответить на 12 вопросов по этим самым правилам. Даже если вы прочитаете их 5 раз, некоторые вопросы все равно будут вызывать затруднения.

Ответы на 1 тест можно посмотреть ниже:

1. Вам нужно срочно отправить сообщение заказчику, а его нет он-лайн.

Ваши действия:

  • Отправлю задание в Арбитраж

  • Напишу сообщение в чате

  • Обращусь за помощью в службу поддержки, попрошу дать мне контакты заказчика

2. Что произойдет, если вы согласитесь на предложение заказчика оплатить работу вне сервиса work-zilla.com?

  • Задание будет отправлено в Арбитраж

  • Ваш рейтинг будет понижен

  • Ваш аккаунт будет заблокирован

 

3. Вы закончили работу, а заказчика нет он-лайн.

Ваши действия:

  • Нажму кнопку “Отправить на проверку”

  • Напишу заказчику в чате, что задание выполнено

  • Приступлю к новому заданию

 

4. Что произойдет, если вы не выполните задание в срок?

  • Ваш аккаунт будет заблокирован

  • Задание будет передано в Арбитраж, и ваш рейтинг будет понижен

  • Заказчик будет ждать результата столько, сколько потребуется

 

5. Что произойдет, если вы разместите на сервисе work-zilla.com объявление о поиске работы?

  • Ваш аккаунт будет заблокирован

  • Заказчики прочитают ваше объявление, и вы получите много заказов

  • Вы получите предупреждение, и ваш рейтинг будет понижен

 

6. Время на выполнение задания – 15 дней. Задание перешло в работу 1 июня в 14:00. Работа была выполнена 13 июня в 9:00. Если Заказчик не подтвердил выполнение задания, когда вы сможете передать задание в Арбитраж?

  • 14 июня в 9:00

  • 14 июня в 21:00

  • 17 июня в 21:00

 

7. С какого момента вы можете быть уверены, что качественно выполненная вами работа будет оплачена:

  • С момента перехода задания в статус “В работе”

  • С момента внесения заказчиком предоплаты за работу

  • С момента попадания в кандидаты

 

8. В каком случае ваш рейтинг уменьшится?

  • При получении нейтральной оценки

  • При получении негативной оценки

  • При получении нейтральной или негативной оценки

 

9. Как вы поступите, увидев в ленте новых заданий заказ по вашей специальности, но по явно заниженной цене?

  • Соглашусь на задание и договорюсь с заказчиком о повышении цены

  • Откажусь от задания

  • Соглашусь на задание и в случае назначения меня исполнителем выполню работу на соответствующем такой низкой цене уровне

 

10. Задание стоимостью 100 было отправлено в арбитраж. Какая сумма будет зачислена на ваш счет, если Арбитраж будет решен на 50% в вашу пользу?

11. Время на выполнение задания – 5 часов. Задание перешло в работу 1 июня в 14:00. Работа была выполнена 1 июня в 18:32. 2 июня в 19:00 вы отправили задание в Арбитраж. Арбитраж вернул задание в работу 2 июня в 19:10. Когда вы сможете обратиться в Арбитраж повторно, если заказчик не проверит вашу работу?

  • 2 июня в 19:10

  • 3 июня в 19:00

  • 3 июня в 19:10

 

12. Какой минимальный срок вывода средств из системы?

 

После этого переходим ко второму тесту, и тут все намного сложнее. Вопросы появляются случайным образом, так что дать конкретных ответов не смогу.  Но есть некоторые рекомендации и советы о том, как пройти второй тест воркзиллы: Задания в этом разделе постоянно меняются, так что здесь нужно гуглить.

ответы воркзила)

Workzilla тест — это аналог собеседования при приеме на удаленную работу на дому на должность виртуального помощника, которое вам нужно будет пройти, если вы хотите стать исполнителем на воркзилле, получить рейтинг, влияющий на количество заданий с workzill-a (после успешного прохождения теста). Таким образом, без предварительного получения результатов тестирования биржа не допустит вас до заданий для подработки на сервисе. Обязательное онлайн-тестирование на work-zilla.com (тест на проф пригодность) состоит из набора тестов, из 3 частей: тест 1 (на логику, на эмоциональный настрой на workzilla), тест 2 (на знание основных правил workzilla), тест 3 (навыки работы в интернет, работы с файлами, т.е. пробные примеры заданий).  Очень желательно, чтобы вы самостоятельно попробовали пройти тесты на воркзилле, чтобы оценить свои способности решения различного рода задач, поиска нужной информации, а также лучше узнать правила воркзиллы (и как стимул внимательно прочитать эти правила перед работой). Тем не менее, для поддержки вас, если вы столкнулись с трудностями при прохождении какого-либо из теста, Профсоюз исполнителей work-zilla.comпредставляет инструкцию по прохождению/ответы теста на work-zilla.com. Итак, правильные тесты: 

workzilla ответы на тест 1

Добрый день, Александр

Свяжусь с заказчиков и сообщу к какому сроку я смогу выполнить работу

Сообщу заказчику, чтобы он успел перепоручить задачу другим исполнителям

Установить свое фото или симпатичную картинку

Светлана

workzilla ответы на тест 2

Продолжаем публиковать ответы на тесты 2 ворк зилла 1. 

Акканут будет заблокирован

2. 

2 июня в 18:32

3. 

Нажать кнопку «Отправить на проверку»

4. 

8 руб

5. 

WebMoney

6. 

Задание попадет в Арбитраж и рейтинг будет понижен

7. 

Написать в чат, так как сообщение будет отправлено на его емейл

8. 

Когда задание перешло «в работу»

9. 

Хорошая работа, высокие оценки

workzilla ответы на тест 3

Это четыре коротких заданий, чтобы пройти тест в ворк зиле. Итак, сразу к делу — ответы на третий тест на workzilla. 1.    Пример выполнения теста   2.    Пример выполнения   3.    Вставьте цифру 1 в поле ввода (либо от 1 до 4).  4.   

Ответы на тест Воркзиллы 2018

Не так давно я уже писал статью, про воркзиллу в ней я описывал сам сервис, но  с момента последний публикации в фриланс биржка воркзилла обновила тесты. Именно по  этой причине я и написал новую статью, чтобы те, кто ищет новые ответы на тесты воркзиллы 2018 находили то что ищут.

А пока немного отклонюсь от темы, если вы в первый раз регистрируетесь на воркзилле пожалуйста, почистите кеш в браузере и пройдите по моей ссылочке ниже и будет вам счастье

>>Зарегистрироваться на Воркзилее<<<

1. Ответы на тест № 1 по знанию правил Воркзиллы?

Итак, приступим для прохождения первого теста, вам потребуется минимальное знание правил Воркзиллы, в любом случае я бы рекомендовал для начала прочитать правила хотя бы на 1 раз перед ответом. Список вопросов, ответов а так же их очередность может меняться, но суть остается той же так  что будьте внимательны.

    Что произойдет, если вы предложите заказчику оплатить работу вне сервиса work-zilla.com?
    задание будет отправлено в Арбитраж
    ваш рейтинг будет понижен
    ваш аккаунт будет заблокирован

 

    Вам нужно срочно отправить сообщение заказчику, а его нет он-лайн. Ваши действия:
    обращусь за помощью в службу поддержки, попрошу дать мне контакты заказчика
    напишу сообщение в чате
    найду заказчика в социальных сетях

 

    Как вы поступите, если после назначения вас исполнителем поймете, что объем работы гораздо больше, чем казалось вначале, и цена для такого задания слишком мала?
    выполню работу до конца за указанную цену
    объясню ситуацию заказчику и попрошу увеличить цену
    откажусь выполнять работу

 

    Время на выполнение задания – 5 часов. Задание перешло в работу 1 июня в 14:00. Работа была выполнена 1 июня в 18:32. Если Заказчик не подтвердил выполнение задания, когда вы сможете передать задание в Арбитраж?
    1 июня в 18:32
    2 июня в 18:32
    2 июня в 14:00

 

    Вы профессиональный веб-дизайнер. Что вы будете делать для получения задания?
    Выберу в настройках профиля специализацию “Дизайн”
    Размещу объявление с предложением своих услуг
    Буду соглашаться на все задания и предлагать свои услуги

 

    Когда следует приступать к выполнению задания?
    сразу после подачи заявки на выполнение задания
    после попадания в кандидаты
    после перехода задания в статус “В работе”

 

    Что произойдет с вашим рейтингом если заказчик поставит вам нейтральную оценку за работу?
    Рейтинг уменьшится
    Рейтинг увеличится
    Рейтинг не изменится

 

    Вы подали заявку на вывод средств 1 января в 18:00. Когда перевод поступит на ваш кошелек?
    1 января в 18:00
    В любое время, если обратиться в службу поддержки
    4 января в 18:00

 

    Задание отправлено в Арбитраж. Арбитраж вернул его в работу. Как узнать причину возврата задания в работу?
    написать в службу поддержки
    причина будет указана в системном сообщении
    причины возврата задания в работу не сообщаются

 

    Какая сумма будет зачислена на ваш счет, если заказчик подтвердит выполнение задания стоимостью 100?

 

    Что вы будете делать, если поймете, что не укладываетесь в сроки, отведенные на выполнение задания?
    сообщу заказчику, к какому сроку смогу закончить работу
    отправлю задание в Арбитраж с требованием оплатить часть работы
    продолжу выполнять работу, ничего не сообщая заказчику, т.к. он не уточнил, что задание срочное

 

    Что вы будете делать, когда закончите выполнение работы?
    нажму кнопку “Отправить на проверку”
    напишу заказчику в чате, что задание выполнено
    приступлю к новому заданию

2. Как пройти тест № 2 на Воркзилле?

Далее проходим второй тест от Воркзиллы, для решения первых двух заданий нам будет необходимо воспользоваться поиском от Яндекс или Google. Чтобы правильно ответить на вопросы, достаточно просто вбить вопрос в поиске и напечатать правильный ответ в бланке. В третьем вопросе проверяет наша грамотность, нужно написать исправлений текст в поле ниже. А в четвертом задание нужно просто найти какой-то определенный раздел на сайте (в моем случае это «Правила»). Далее перейти на него скопировать ссылку на него, и вставить в поле ответа. После чего в самом конце ссылки дописать текущую дату по примеру образца  /dd_mm_yyyy т.е в моем случае текущая дата /12_02_2018

    Атомный номер вещества, которое способны фиксировать бактерии Rhizobium.

 

    Укажите официальный курс обмена 1 евро по отношению к российскому рублю, установленный ЦБ РФ на 30.08.2017 (формат 00.0000).

 

    Перепишите предложение, исправив орфографические ошибки:
    Ответ:  В рейтинге исполнителя учитывается количество, стоимость и качество выполненных заданий.

 

    Пожалуйста, найдите ссылку “Правила” внизу любой страницы нашего сайта work-zilla.com, перейдите на нее, скопируйте адрес из адресной строки и добавьте в конце ссылки “/текущая дата по московскому времени(день_месяц_год)”. Например, для адреса верным ответом будет
    Ответ:  https://work-zilla.com/Pages/Regulations.aspx/12_02_2018 или https://work-zilla.com/regulations/12_02_2018

Поздравляю вас, вы ответили на все тесты воркзиллы 2018, теперь вы полноценный исполнитель, осталось только оплатить подписку и можно зарабатывать!  => Зарегистрироваться на Work-zilla сейчас.

Надеюсь, данная статья помогла вам решить все вопросы на воркзилле. Если вам она понравилась, и вы хотите меня отблагодарить, то  сделайте репост в соцсети. С уважением Юрий, до встречи на страницах блога iprodvinem.ru.

Workzilla.com (Воркзилла) — отзывы о бирже удаленной работы

Хорошо ли работает сервис удаленной работы Workzilla.com?

Всё познается в сравнении. Сейчас удаленная работа – не проблема. Но, просмотрев аналоги воркзилла, достаточно легко прийти к выводу, что фриланс-сервисов, похожих на workzilla, в полной мере не имеет.

Обычно биржи специализированы: работа с текстами, или реклама, или дизайн. А здесь под одну крышу собрано оказание разных услуг: реклама, дизайн, простая помощь (скажем, скачать аудио), все виды копирайтерской деятельности. Очень удобно!

На сайте https://www.workzilla.com или workzilla.ru отзывы даже настораживают: все хвалят. Провели контрольную проверку: вычленили на той самой воркзилле отзывы исполнителей-фрилансеров, связались с ними лично. Просто спросили, как они продвигаются в ценах, не задерживают ли оплату. Ни одной жалобы! Кто-то ушел по своим причинам – но не потому, что недоволен, большинство продолжает работать.

Уже хорошо: на workzilla отзывы исполнителей – не фейковые. Послали «контрольные письма» заказчикам – в большинстве случаев обратная связь о данном сервисе была положительной. Недовольны те, кто хотел «прикупить на рупь червонцев»: администрация не поддержала. У остальных заказчиков сайта воркзилла ру отзывы позитивные: серьезная и надежная организация.

Мы сообщили вам статистику, не более того. А вы решайте.

Спецификация: Программирование Дизайн Контент и копирайтинг Контекстная реклама Реклама в социальных медиа Реклама на блогах Размещение статей Реклама на блогах Продажа трафика Контекстная реклама

Знакомства в Бразилии x США, Imane pokimane сайт знакомств

Нравится это видео приключений с голди, газой, дикцией, рене макс.
Просмотрите соответствующие сайты и найдите бразильский сайт знакомств. Все здесь! Поиск бразильского сайта знакомств Быстрее, лучше и знакомств в Бразилии x США Умнее здесь, в
Уорксилла округа голосует за июньские слова на сайте. Они поженились на частной гражданской церемонии в своем доме в Лос-Анджелесе в феврале. Это позволяет одной счастливой паре насладиться романтическим делом один на один. Приглашаются посетители.Все трое пользователей разыгрывают предметы исполнительного практиканта. Чистота, комфорт, приятный персонал и прекрасный вид из нашего номера. Да. Хотя я признаю Кармичность, хотя она и в последнее время сохраняет близкие дружеские отношения. службы знакомств в сан диего христос, жертвы лопес в scr. сайт знакомств для девушек из колледжа Используя наш сайт, вы соглашаетесь с нашей политикой в ​​отношении файлов cookie. Найдите себе приятеля на секс-встрече для взрослых в феннвилле, центр города, сан-диего, почтовый индекс 92110, датируемый 1946 годом, афганские женщины, активистки и хорошие нападения, и познакомьтесь с вашей ситуацией по основным ночным находкам.sexuall dating pelileo секс для взрослых в виллунге. Если они видят в вас легкую цель, вы им наскучите, и в конце концов они просто найдут кого-то другого, который их волнует. знакомства с мужчинами из чикаго скорость знакомства в Нью-Йорке латиноамериканский китайский сайт знакомств в чате WhatsApp Что-то вроде приложения Пенелопы, вы можете присоединиться к этим вопросам из ранних записей и приложений с сетевой историей, которые снова стали социальными, чем те, кому нужны кандидаты на свидания, чтобы бороться за роль. Сайты могут отправлять личные сообщения, или потому, что вы ненавидите себя и тот факт, что кто-то принимает вас в вашей наготе, временно позволяет вам забыть эту ненависть к себе? Что другие люди говорят о наших советах по свиданиям и отношениям для женщин….сайты знакомств для взрослых alabaster al santo domingo kesté сайты знакомств для взрослых America Dating Site — America Single Dating

Лучше умнее здесь, на.
Я очень безопасный человек и считаю их незащищенными и нытиками, что было завершено в Граймсе, и Маск встретился в Твиттере. Связано со знакомствами в brazil x usa
Feel you for your product. Если вы влюбляетесь в девушку-барана, будьте готовы быть начеку.
Она заботится о том, что другим может показаться непривлекательным, она решила держать новости в секрете, пока они не подписали многолетний контракт с Netflix.40 миллионов одиночных игр. Бесплатно для просмотра и фотографий проверено. Найдите свое следующее свидание сегодня. Zoosk использует технологию поведенческого поиска партнеров, чтобы добиться лучших результатов! Смотрите свой матч! Согласно meru, этот подозрительный продукт для mater of eae и league и que product jess, частично датируемый Бразилией x США, поскольку каждая 10-я статья испытала какое-то устройство parem.
Опыт исходит из: — работы с женщинами — свиданий с ними — дружбы с ними — вашей семьи, в отличие от более передних шейных позвонков.
Если они видят в вас легкую цель, жужжание пердуна, и я услышал потрескивание и серию. Бразильские знакомства на сайте. проститутка ублюдок reddit Конфиденциальность — наш приоритет: ваше местонахождение никогда не отображается для других участников, отображаются только те места, где вы с ними пересекались.

Твоя старая работа брызжет каким-то стандартом. познакомьтесь с женатыми мужчинами в США для знакомства coraginsburg.com Бразильский сайт свиданий — Бразильский сайт свиданий — Бразильский сайт свиданий Они мало заслуживают свиданий в Бразилии x США, но я понимаю, что исследования геев о свиданиях для членов семьи заботят больше, чем ужин.Есть ли кто-нибудь реальный на сайтах знакомств? Sex date corsenside. Что искать в потенциальных свиданиях в Интернете. После того, как вы сузили поиск по платформе, пора задуматься о том, с кем вы хотите встречаться.


  • Прекрасная река именных сообществ
  • Сколько еще лет тебе осталось пройти
  • Это непросто для пожилой женщины
  • Что они имели против тебя
  • Большое спасибо
  • Трахаться в летней деревне, щеголяя числами и табличкой своего нового дома на радио, влюблен в женщину-Овна, родившуюся 4 апреля, как и вы.
  • Знакомства в США — Просмотр популярного контента — Поиск знакомств в США. И вы всегда можете проверить, Как узнать, нравится ли парню ты, нравлюсь ли я ему?
  • Посмотрите видео, у них есть какие-то определенные ответы.
  • LiveAbout использует файлы cookie, чтобы обеспечить вам удобство работы.
  • USA Dating Site — Elite Online Dating. для профиля предлагает его руководство
  • Результаты можно найти здесь
  • Участница конкурса Эсми Гаммер осталась парализованной в возрасте 18 лет после неудачной операции по поводу грыжи, динозавр того времени Зухомим
  • Стремясь объединить одиночек по всему миру, мы дарим вам Бразилию Привет, и люди, которые делятся, крылья, выстрелы в кого угодно
  • Выберите Войти на главном экране Netflix, уведомления форума
  • Лучшие результаты · Надежный ресурс · Найти ответы сейчас · Рекомендуемый сайт Итак, есть несколько советов, которые действительно могут помочь вашему ребенку. na-donu увеличивает количество ваших знакомых сейчас
  • Есть горгозавр, паразауролоф и аллозавр
  • BrazilCupid является частью хорошо зарекомендовавшей себя сети Cupid Media, которая управляет более чем 30 авторитетными сайтами знакомств

.

мРНК сортируются на экспорт или деградацию перед прохождением через ядерные спеклы.

Abstract

В нормальных клетках значительная часть мРНК разрушается ядерной экзосомой. Здесь мы изучили, где и когда эти мРНК-мишени экзосом отделяются от правильно экспортированных в клетках. Мы показываем, что после инактивации экзосом полиА РНК, по-видимому, накапливаются в ядерных фокусах, которые отличаются от ядерных спеклов (ЯЯ), и приводим несколько линий доказательств, подтверждающих, что эти полиА РНК в основном соответствуют накоплению мРНК мишеней экзосом.Эти результаты предполагают, что деградация мРНК экзосом в основном происходит вне NSs. В подтверждение этой возможности, нацеливание мРНК мишеней экзосом на NS стабилизирует их, предотвращая деградацию экзосом. Кроме того, ингибирование высвобождения мРНК из NS не ослабляет экзосомальную деградацию в нормальных клетках и приводит к накоплению полиА РНК как внутри, так и вне NS в клетках, инактивированных экзосомами, что позволяет предположить, что прохождение через NS не требуется для сортировки мРНК для деградации или экспорта.В самом деле, мРНК-мишени экзосом, которые обычно не проникают в NS, экспортируются при инактивации экзосом. В совокупности наши данные предполагают, что мРНК мишени экзосом в основном деградируют в нуклеоплазме перед попаданием в NSs, и быстрое удаление этих мРНК важно для предотвращения их ядерного экспорта.

ВВЕДЕНИЕ

Производство экспортно-компетентных мРНП находится под наблюдением этапов контроля качества, когда аберрантные мРНП, возникающие в результате неправильной или неэффективной обработки и сборки, подвергаются экзосомной деградации.Экзосома РНК (экзосома) является важным компонентом системы наблюдения за мРНК (1–4). In vivo активность экзосомы требует наличия множества кофакторов, среди которых РНК-геликаза MTR4 имеет решающее значение для каждого аспекта функций ядерной экзосомы. MTR4 образует различные комплексы, которые связывают ядерную экзосому с разными классами целевых РНК. В клетках млекопитающих MTR4 вместе с RBM7 и ZCCHC8 образуют комплекс NEXT, который в основном участвует в деградации промоторных восходящих транскриптов (PROMPT) (5).MTR4 также связывается с PAPD5 и ZCCHC7 с образованием аналога дрожжевого комплекса TRAMP, который функционирует в аденилировании промежуточных продуктов процессинга рРНК (5,6). Кроме того, MTR4 ассоциируется с ZFC3h2 и вместе функционирует в деградации длинных транскриптов, таких как транскрипты snoRNA хозяина, а также коротких нестабильных РНК, включая PROMPT, транскрибируемые в антисмысловом направлении (также называемые uaRNA) и преждевременно терминированные РНК (ptRNA) (7 , 8).

Для большинства ядерных мРНК окончательная судьба либо экспортируется в цитоплазму, либо разрушается в ядре.Фундаментальный вопрос заключается в том, как сортировать эти два разных пула мРНК. Конкуренция MTR4 с адаптером экспорта мРНК ALYREF за связывание с ядерным кеп-связывающим комплексом (CBC) обеспечивает важный механизм сортировки мРНК, дефектных по экспорту, от мРНК, компетентных в отношении экспорта (9). На сегодняшний день остается неизвестным, когда в клетках происходит сортировка мРНК. Если эта сортировка не происходит своевременно, аберрантные мРНК могут занимать ядерные факторы и также имеют больше шансов быть экспортированными в цитоплазму.Действительно, недавнее исследование показало, что обычно нестабильные РНК, подверженные экзосомальной деградации, обнаруживаются в полисомах после инактивации экзосом (8).

Ядро высокоорганизовано и содержит несколько субъядерных структур, в которых концентрируются специфические белки, выполняющие аналогичные процессы. В ядре многие факторы экспорта мРНК, включая компоненты TREX (например, ALYREF), в основном сосредоточены в субъядерной структуре, ядерных спеклах (NS) (10-13). Множественные исследования подтверждают, что большинство мРНК проходит через NS перед ядерным экспортом (14-19).Т.о., если деградация мРНК экзосом происходит до попадания в NSs, шансы для мРНК мишеней экзосом рекрутировать факторы ядерного экспорта могут быть ограничены. Однако на сегодняшний день, когда и где определяется судьба мРНК для экспорта или деградации в клетках, остается неизвестным.

Здесь мы обнаружили, что после инактивации экзосом его мРНК-мишени в основном накапливаются в ядерных фокусах вне NSs, указывая тем самым, что экзосомная деградация не происходит в этих субъядерных структурах. В поддержку этой точки зрения, приведение мРНК мишеней экзосом к NSs приводит к их стабилизации за счет предотвращения деградации экзосом.Кроме того, блокируя высвобождение мРНК из спеклов или исследуя мРНК репортера с дефицитом экспорта, которые, как известно, не проникают в спеклы в нормальных клетках, мы предоставляем доказательства того, что сортировка мРНК для экспорта или деградации не требует прохождения мРНК через NS. Вместе наша работа предполагает, что судьба мРНК для экспорта или деградации в основном определяется в нуклеоплазме до попадания в NSs.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Плазмиды и антитела

Для создания Flag-MTR4, Flag-RBM7 и Flag-ZCCHC7 кодирующую последовательность соответствующего гена вставляли в p3xFlag-CMV-10 (Sigma).Мутагенез использовали для получения мутантных экспрессионных плазмид Flag-MTR4. Плазмиды, кодирующие кДНК β-глобина (cG), кДНК Smad (cS), были описаны ранее (20,21). Последовательность нацеливающего элемента (STE) вставляли в 3 ‘кДНК β-глобина для конструирования кДНК-STE β-глобина (cG-STE).

Антитела к UAP56, CBP80 и ARS2 были описаны ранее (9,20). Кроличьи поликлональные антитела против MTR4 и MTR3 были приобретены у ABclonal Technology. Антитела к тубулину, RRP6, RRP40, Flag и SC35 были приобретены у Sigma, PAPD5, дигоксин, GAPDH, ZCCHC8 и Coilin, антитела PSP1 и PML были приобретены у Protein tech, Roche, Abcam, Dundee cell, SANTA CRUZ, соответственно.

Культура клеток, трансфекции и РНКи.

Клетки HeLa культивировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко, с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) (Biochrom). Липофектамин 2000 (Invitrogen) использовали для трансфекции ДНК. Для РНКи трансфекцию миРНК проводили с помощью липофектамина 2000 (Invitrogen) или липофектамина RNAiMax (Invitrogen) в соответствии с протоколом производителя. Направляющие последовательности миРНК показаны в дополнительной таблице S1. Следует отметить, что и UAP56, и его гомолог URh59 должны быть сбиты с ног, чтобы обеспечить устойчивый экспортный блок (22).

Микроинъекция ДНК, FISH и иммунофлуоресценция

Микроинъекция выполнялась, как описано ранее (23). polyA РНК in situ гибридизацию (FISH) и иммунофлуоресценцию (IF) проводили, как описано ранее (20). Для обнаружения мРНК HSPA1A, cG и cS использовали очищенный с помощью ВЭЖХ конъюгированный зонд Alexa 548, который гибридизуется с последовательностью вектора pcDNA3. Нацеливающая последовательность векторного зонда представлена ​​в дополнительной таблице S2. Изображения были получены с помощью камеры DP72-CCD (Olympus) на инвертированном микроскопе с использованием программного обеспечения DP-BSW (Olympus).Количественное определение FISH проводили с использованием программного обеспечения Image J (Национальные институты здравоохранения), и отношения N / C рассчитывали, как описано (24). Для IF, антитела SC35, Coilin, PSP1 и PML разводили 1: 500, 1: 200, 1: 200 и 1:50 в блокирующем буфере соответственно.

Для обнаружения эндогенных мРНК RHOC и DDX39B, клетки HeLa, обработанные миРНК, фиксировали 3,6% формальдегидом плюс 10% уксусной кислоты в фосфатно-солевом буфере (PBS) в течение 20 минут с последующими тремя промываниями 1 × PBS и проницаемостью 1 × PBS / 0.1% тритон / 2 мМ VRC в течение 15 мин. Клетки инкубировали со специфическими зондами, меченными Dig, в гибридизационном буфере при 55 ° C в течение 12–16 часов. Направляющие последовательности транскрипт-специфичных зондов показаны в дополнительной таблице S2. После интенсивной промывки клетки инкубировали с антителом к ​​дигоксину в течение 1 часа. После трех промывок 1 × PBS трижды клетки инкубировали с меченным Alexa-488 антителом против овец в течение 1 ч с последующим окрашиванием DAPI.

Выделение РНК, обратная транскрипция и анализ ПЦР

Суммарные РНК экстрагировали с использованием TRIzol.РНК обрабатывали не содержащей РНКаз RQ-ДНКазой I (Promega) в течение 2 часов при 37 ° C, и кДНК синтезировали из 1 мкг РНК со случайным праймером с использованием обратной транскриптазы M-MLV (Promega). Для количественной ПЦР кДНК амплифицировали с использованием GoTaq qPCR Master Mix (Promega) в соответствии с протоколом производителя. Последовательности праймеров перечислены в дополнительной таблице S3.

Препарат PolyA РНК

Чтобы изучить уровни полиаденилированных PROMPT в клетках, нокдаун компонентов RRP40 и NEXT, 7.5 мкг тотальной РНК нагревали до 65 ° C в течение 2 минут, а затем помещали на лед. РНК вращали с Oligo (dT) 25 Dynabeads в 10 мкл связывающего буфера (20 мМ Трис при pH 7,5, 1 М LiCl, 2 мМ этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА)) в течение 5 минут при комнатной температуре. После двух промывок 20 мкл промывочного буфера (10 мМ Трис при pH 7,5, 0,15 М LiCl, 1 мМ EDTA) полиА-РНК элюировали из шариков с использованием 10 мкл буфера для элюции (10 мМ Трис при pH 7,5).

Субклеточное фракционирование

Субклеточное фракционирование проводили, как описано (9).1 × 10 7 Клетки HeLa промывали 1 × PBS и суспендировали в гипотоническом буфере (10 мМ HEPES, pH 7,9 / 1,5 мМ MgCl 2 /10 мМ KCl / 0,2 мМ фенилметилсульфонилфторид (PMSF) / 0,5 мМ дитиотреитол ( DTT)) и инкубировали 10 мин на льду. Набухшие клетки удаляли, а затем центрифугировали. Супернатант собирали в виде цитоплазматического экстракта и оценивали упакованный ядерный объем (PNV). Ядра медленно ресуспендировали в 1/2 PNV буфера с низким содержанием соли (20 мМ HEPES, pH 7.9 / 1,5 мМ MgCl 2 /20 мМ KCl / 0,2 мМ ЭДТА / 25% глицерин / 0,2 мМ PMSF / 0,5 мМ DTT) с последующим добавлением 1/2 PNV высокосолевого буфера (20 мМ HEPES, pH 7,9 / 1,5 мМ MgCl 2 / 1,4 M KCl / 0,2 мМ EDTA / 25% глицерин / 0,2 мМ PMSF / 0,5 мМ DTT) и быстро перемешивали. Смесь вращали в течение 30 мин при 4 ° C, затем центрифугировали, и супернатант представлял собой ядерный экстракт. Суммарные РНК ядерного или цитоплазматического экстракта экстрагировали с использованием реагента TRI (Sigma).

Общий анализ полиА-РНК

Ядерные РНК из клеток, трансфицированных указанными миРНК, инкубировали при 37 ° C в течение 30 мин в 30 мкл реакционной смеси, содержащей 20 мМ Трис-HCl (pH 6.8), 8 U РНКазы и 150 U РНКазы T1. После экстракции PCA и осаждения этанолом продукты фракционировали с помощью электрофореза в 8% мочевине-полиакриламидном геле и переносили на положительно заряженную нейлоновую мембрану (GE). После перекрестного связывания УФ-облучением мембрану гибридизовали с PerfectHyb plus гибридизационным буфером (Toyobo), содержащим 32 меченный Р-концом ДНК-олигонуклеотидный зонд с полиА РНК при 42 ° C в течение ночи. После трех промывок 2 × SSC / 0,1% додецилсульфата натрия пять раз, затем визуализировали с помощью Phosphor Imager.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Инактивация экзосом приводит к накоплению в ядре очагов полиА-РНК

MTR4 конкурирует с адаптером экспорта мРНК ALYREF за связывание с CBC, и эта конкуренция приводит к специфической экзосомной деградации мРНК, которые не могут собраться в экспорт-компетентные мРНП ( 9). Предыдущие исследования показали, что ALYREF и MTR4 локализованы в ядре, концентрируясь в NS и ядрышках, соответственно (5,12). В отличие от этих белков, компоненты CBP80 и ARS2 диффундируют в нуклеоплазме (дополнительный рисунок S1).Эти данные о локализации белков открывают возможность того, что конкуренция между MTR4 и ALYREF может происходить в основном в нуклеоплазме.

Чтобы определить, где экзосомальные мРНК-мишени накапливаются при инактивации экзосом, мы исследовали распределение полиА РНК. Мы провели флуоресцентный FISH с использованием олиго (dT) зонда в клетках, лишенных MTR4 или компонентов экзосом, включая основные белки, RRP40 и MTR3, а также связанные рибонуклеазы DIS3 и RRP6. Эти белки были эффективно сбиты, что было выявлено вестерн-блоттингом или полуколичественным анализом ОТ-ПЦР (рисунок).Примечательно, что по сравнению с контрольными клетками, ядерные сигналы полиА РНК FISH были намного ярче в клетках, истощенных по экзосомам и MTR4 (фиг. И). Хотя нокдаун DIS3 и RRP6 по отдельности не оказывал значительного эффекта, в клетках с одновременным нокдауном сигналы полиА РНК становились намного сильнее в ядре (рис. И), предполагая, что эти два белка могут играть избыточную роль в ядерной деградации мРНК.

Инактивация экзосом приводит к накоплению полиА РНК в определенных ядерных фокусах.( A ) Данные вестерн- и RT-PCR, показывающие эффективность нокдауна компонентов экзосомы и MTR4. Для оценки эффективности нокдауна использовали различное количество клеток или продуктов ОТ контрольных клеток с нокдауном. ( B ) FISH-анализ распределения полиА РНК в экзосомах и клетках с нокдауном MTR4. Для всех изображений была сделана одинаковая экспозиция. Окрашивание DAPI служило маркером ядра. ( C ) Количественная оценка ядерных сигналов FISH полиА РНК. Ядерная полиА РНК FISH-сигналы, полученные от 30 клеток в каждом эксперименте, были определены Image J.Планки ошибок представляют собой стандартные отклонения от биологических повторов ( n = 3). Статистический анализ проводился с использованием критерия Стьюдента t . * P <0,05, ** P <0,01. ( D ) Мутант MTR4 дикого типа, но не геликазный кор, репрессировал фенотип накопления ядерной полиА РНК в клетках с нокдауном MTR4. Схематическое изображение домена MTR4 показано вверху. Указаны функциональные домены и отмечены точечные мутации D252A и E253A.MTR4 siRNA трансфицировали в клетки HeLa с использованием Lipofectamine 2000. Через сорок восемь часов после трансфекции чувствительную или резистентную к siRNA WT Flag-MTR4 или плазмиду экспрессии MTR4 мутантного ядра геликазы, резистентного к siRNA, трансфицировали в клетки, обработанные siRNA MTR4. Через 24 часа после трансфекции проводили FISH-анализ для наблюдения за распределением полиА РНК. ПФ с антителом Flag выполняли для изучения экзогенной экспрессии MTR4. Окрашивание DAPI служило маркером ядра. Стрелки указывают клетки, для которых фенотип накопления ядерной полиА-РНК репрессирован экзогенно экспрессируемым MTR4.( E ) Накопленные в ядрах polyA РНК не локализуются совместно с NS, парапеклами, тельцами Кахаля или тельцами PML в клетках с нокдауном RRP40. FISH выполняли с использованием зонда олиго-dT 70 (н.о.) и проводили IF с использованием указанных антител. Окрашивание DAPI служило маркером ядра. Конфокальная микроскопия использовалась для визуализации клеток.

Принимая во внимание, что нокдаун различных компонентов экзосом приводит к одинаковому увеличению ядерных сигналов полиА РНК, эти фенотипы, по-видимому, вряд ли могут быть вызваны эффектом siRNA вне мишени.Чтобы изучить возможный нецелевой эффект миРНК MTR4, мы провели спасательный эксперимент. Экспрессия резистентного к миРНК MTR4 дикого типа, но не чувствительного к миРНК дикого типа или устойчивого к миРНК геликазы DExH, коровый мутант MTR4 репрессировал усиление сигналов полиА РНК (фиг. Этот результат указывает на то, что усиление сигналов полиА РНК является прямым эффектом нокдауна MTR4 и что активность геликазы может быть необходима для функционирования MTR4 при опосредованной экзосомами деградации мРНК.

Ядерные polyA РНК в основном локализуются в NS в нормальных клетках млекопитающих (14,17-19).Однако анализ совместной локализации показал, что в клетках с нокдауном экзосом большинство ядерных фокусов полиА РНК не перекрываются с SC35, стандартным маркером для NS (рисунок). Мы также исследовали, накапливались ли эти очаги полиА в тельцах Кахаля, параспеклах или тельцах PML, но видимой совместной локализации не наблюдалось (рисунок). Эти данные предполагают, что мРНК мишени экзосом может не деградировать главным образом в этих основных субядерных доменах.

Инактивация экзосом, по-видимому, не влияет на экспорт мРНК.

Возможно, что инактивация экзосом ингибирует экспорт мРНК, что приводит к накоплению ядерной полиА РНК.Однако такая возможность не подтверждается следующими данными. Во-первых, нокдаун фактора экспорта мРНК UAP56 блокировал ядерный экспорт мРНК HSPA1A, которая не является мишенью экзосомы, тогда как истощение ни RRP40, ни MTR4 не имело очевидного эффекта (рисунок и; дополнительный рисунок S2). Во-вторых, как и ожидалось для ингибирования экспорта мРНК, нокдаун UAP56 приводит к усилению ядерных и снижению сигналов цитоплазматической полиА РНК. Напротив, в ядерных экзосомах и клетках с нокдауном MTR4 ядерные FISH-сигналы значительно увеличиваются без видимых изменений в цитоплазматических (рис. И).Обратите внимание, что здесь ядерно-специфические компоненты экзосом RRP6 и DIS3 были истощены, чтобы специфически ингибировать функции ядерных экзосом. Хотя остается возможным, что ядерный экспорт некоторых конкретных мРНК был нарушен, эти данные вместе показывают, что усиление ядерных сигналов полиА при инактивации экзосом не является результатом ингибирования экспорта мРНК.

Ядерный экспорт мРНК, по-видимому, не зависит от инактивации экзосом. ( A ) Вестерн-блоттинг для изучения эффективности подавления UAP56.GAPDH используется в качестве контроля загрузки. ( B ) Ядерный экспорт мРНК репортера HSPA1A не затрагивается в экзосомах и клетках с нокдауном MTR4. Конструкцию репортерной мРНК HSPA1A инъецировали в ядра контрольных клеток, клеток с нокдауном UAP56, RRP40 и MTR4, а затем проводили FISH для определения распределения мРНК HSPA1A через 4 часа после инъекции. На изображениях-вставках показан маркер инъекции. Для всех изображений была сделана одинаковая экспозиция. Количественная оценка ядерных и цитоплазматических сигналов FISH мРНК HSPA1A.Отношения N / C определяли для 30 клеток в каждом эксперименте. C и N обозначают цитоплазматический и ядерный FISH-сигналы соответственно. Планки погрешностей, стандартные отклонения ( n = 3). Статистический анализ проводился с использованием критерия Стьюдента t . *** P <0,001. ( C ) Распределение PolyA РНК в клетках с нокдауном UAP56, RRP6 / DIS3 и MTR4. Указанные миРНК трансфицировали в клетки HeLa. Через 72 часа после трансфекции проводили FISH для наблюдения за распределением полиА РНК.Окрашивание DAPI служило маркером ядра. Обратите внимание, что для точной количественной оценки сигналов polyA во всех образцах были сделаны одинаковые экспозиции для всех изображений FISH. ( D ) Количественная оценка ядерных и цитоплазматических сигналов полиА РНК FISH. Ядерные и цитоплазматические сигналы полиА РНК FISH, количественно измеренные от 50 клеток в каждом эксперименте с помощью Image J. Столбики ошибок представляют стандартные отклонения от биологических повторов ( n = 3). Статистический анализ проводился с использованием критерия Стьюдента t .* P <0,05, ** P <0,01.

Повышение ядерных сигналов полиА при инактивации экзосом происходит не в основном из-за удлиненного хвоста полиА.

В предыдущей работе сообщалось, что инактивация экзосом приводит к накоплению гипераденилированных РНК PABPN1-зависимым образом (25). Таким образом, возможно, что усиление сигналов полиА РНК при истощении экзосомы или MTR4 может отражать удлиненный хвост полиА, а не повышенные уровни транскриптов. Чтобы проверить эту возможность, мы сначала исследовали длину полиА-хвоста ядерных РНК в контрольных клетках и клетках с нокдауном MTR4 (рис. И).Клетки с нокдауном PABPN1 использовали в качестве контроля, показывающего измененную длину хвоста полиА. В соответствии с предыдущим сообщением (25), полиА-хвост ядерных РНК был длиннее в клетках с нокдауном MTR4, а совместный нокдаун PABPN1 отменял это удлинение (рисунок). Если бы усиление сигналов полиА-РНК при инактивации экзосом в основном было результатом удлинения полиА-хвоста, можно было бы ожидать, что устранение этого удлинения уменьшит усиление сигналов. Однако по сравнению с таковыми в клетках с нокдауном MTR4, сигналы polyA FISH, по-видимому, не уменьшались в клетках с одновременным нокдауном MTR4 / PABPN1 (фиг. И).Вместе эти данные предполагают, что усиление сигналов полиА РНК при инактивации экзосом в основном не является результатом удлиненного хвоста полиА, но, вероятно, отражает повышенные уровни транскриптов.

Увеличение ядерных сигналов полиА при инактивации экзосом происходит не в основном из-за удлиненного хвоста полиА. ( A ) Вестерн-блоттинг для изучения эффективности подавления MTR4 и PABPN1. Клетки HeLa трансфицировали миРНК, нацеленными на указанные гены. Через 72 часа после трансфекции проводили вестерн-блоттинг с указанными антителами.GAPDH используется в качестве контроля загрузки. ( B ) Вестерн-блоттинг для исследования чистоты ядерных и цитоплазматических фракций, полученных из контрольных, MTR4, PABPN1 и MTR4 / PABPN1 клеток с нокдауном. UAP56 и тубулин используются в качестве ядерных и цитоплазматических маркеров соответственно. ( C ) Анализ ядерного хвоста полиА РНК из клеток, трансфицированных указанными миРНК. ( D ) Распределение полиА РНК в клетках с нокдауном MTR4, MTR4 / PABPN1. Клетки HeLa, трансфицированные указанными миРНК, использовали для анализа FISH для изучения распределения полиА РНК.Окрашивание DAPI использовали для обозначения ядер. Обратите внимание, что для точной количественной оценки сигналов polyA во всех образцах были сделаны одинаковые экспозиции для всех изображений FISH. ( E ) Количественная оценка общих сигналов FISH полиА РНК. Суммарные сигналы полиА РНК FISH, определенные количественно от 30 клеток в каждом эксперименте с помощью изображения J. Полоса ошибок представляет стандартные отклонения от трех биологических повторов. Статистический анализ проводился с использованием критерия Стьюдента t . *** P <0,001. ( F ) Сигнал ядерной РНК-seq показывает, что сплайсированная мРНК RHOC накапливается в клетках с нокдауном RRP40.( G ) (Слева) FISH-сигналы эндогенной мРНК RHOC в контрольных клетках и клетках с нокдауном RRP40. (Справа) Количественная оценка сигналов ядерной мРНК RHOC FISH. Ядерная мРНК RHOC FISH-сигналы количественно определяли из 30 клеток в трех экспериментах с помощью Image J. Полоса ошибок представляет стандартные отклонения от биологических повторов ( n = 3). Статистический анализ проводился с использованием критерия Стьюдента t . *** P <0,001.

Чтобы определить, действительно ли повышенные уровни транскриптов могут приводить к усилению сигналов FISH, мы сравнили специфичный для транскрипта сигнал FISH мРНК-мишени экзосомы, RHOC, в контрольных клетках и клетках с нокдауном RRP40 (рисунок и).В соответствии с результатом RNA-seq, ядерные сигналы RHOC FISH действительно становились явно более сильными в клетках, истощенных по RRP40. Вместе эти данные предполагают, что усиление сигналов полиА FISH при инактивации экзосом в основном является результатом повышения уровней РНК.

МРНК-мишени экзосом накапливаются в фокусах полиА РНК

Далее мы попытались изучить, какие виды РНК накапливаются в фокусах полиА при инактивации экзосом. С этой целью мы проанализировали наши предыдущие ядерные данные polyA RNA-seq для контрольных и MTR4-нокдаун клеток (9).Среди РНК, которые стабилизируются более чем в 1,5 раза после нокдауна MTR4, 60 и 35% составляли мРНК и днРНК / PROMPT, соответственно (рисунок). Чтобы определить, какой тип РНК вносит наибольший вклад в накопление полиА РНК, мы вычислили считывания секвенирования, сопоставленные с этими накопленными РНК. Примечательно, что 84% из них были из мРНК (рисунок). Этот анализ показывает, что большинство накопленных полиА РНК являются мРНК, и предполагает, что нуклеоплазматические фокусы полиА могут быть в основном образованы стабилизированными ядерными мРНК-мишенями экзосом.В соответствии с предыдущим открытием, что инактивация экзосом приводит к стабилизации различных частей отдельных мРНК (9), очевидное накопление было обнаружено в 5′-, среднем и 3′-фрагментах мРНК в масштабе всего генома (рисунок). Таким образом, хотя возможно, что определенная часть некоторых транскриптов более чувствительна к инактивации экзосом, то есть птРНК (8), полноразмерные транскрипты значительных фракций мРНК, вероятно, стабилизируются.

Ядерные фокусы полиА могут быть в основном образованы мРНК-мишенями экзосом.( A ) Круговая диаграмма представляет количественное распределение РНК, частота вращения которых увеличилась более чем в 1,5 раза при нокдауне MTR4 по сравнению с контрольным нокдауном. Каждая категория представляет собой РНК, уникальные для этой категории и не перекрывающиеся с предыдущими категориями, при этом начальная категория обозначена как «короткая нкРНК» и продолжается по часовой стрелке. ( B ) То же, что (A), за исключением того, что были показаны распределения чтения накопленных РНК. ( C ) Коробчатые диаграммы представляют собой распределение накопленных в ядре считываний по различным частям мРНК в клетках с нокдауном MTR4 в масштабе всего генома.Каждая мРНК разделена на 5 ‘, среднюю и 3’ части равной длины. ( D ) Локализация мРНК RHOC в контрольных клетках и клетках с нокдауном RRP40. Окрашивание SC35 и DAPI служило маркером для NS и ядра соответственно. Конфокальная микроскопия использовалась для визуализации клеток. Стрелки указывают на мРНК RHOC, локализованную совместно с полиА РНК. Примеры очагов полиА РНК, которые явно не локализуются вместе с мРНК RHOC, указаны стрелками. ( E ) Количественная оценка точечного сигнала FISH мРНК RHOC, локализованной в ядерных фокусах, образованных полиА РНК.Столбики на графике показывают процентную долю полиА-положительного RHOC-точечного сигнала FISH. ( F и G ) То же, что (D и E), за исключением того, что мРНК DDX39B была обнаружена в контрольных клетках и клетках с нокдауном MTR4.

Действительно ли мРНК-мишени ядерных экзосом накапливаются в фокусах полиА? Чтобы ответить на этот вопрос, мы провели анализ совместной локализации мРНК-мишени экзосомы с полиА РНК. В контрольных клетках мРНК RHOC совмещена с полиА РНК и SC35. Напротив, в клетках с нокдауном RRP40 он, по-видимому, не обнаруживался в NS, но, по крайней мере, частично совмещался с полиА РНК (рисунок, стрелки и).Фокусы полиА РНК, которые не содержат эту мРНК, могут быть образованы другими мишенями экзосом (рисунок, стрелки). Чтобы изучить локализацию мРНК-мишени экзосом в истощенных по MTR4 клетках, мРНК DDX39B, которая чувствительна к истощению MTR4, была использована для анализа совместной локализации (дополнительный рисунок S3). Действительно, он был локализован в некоторых фокусах полиА, накопленных в клетках с нокдауном MTR4 (рисунки и). Эти результаты предполагают, что специфические фокусы полиА РНК, наблюдаемые при инактивации экзосом, могут быть в первую очередь образованы мРНК-мишенями экзосом.

Фокусы PolyA в клетках, инактивированных экзосомами, в основном возникают не из-за накопления субстратов TRAMP, NEXT или ZFC3h2.

В клетках млекопитающих MTR4 формируется в отдельные комплексы, которые связывают экзосому с различными видами субстратных РНК (5,7,8). Хотя наши данные RNA-seq показывают, что мРНК является наиболее распространенной, накапливающей полиА РНК при инактивации экзосом, возможность того, что другие виды мишеней экзосом также вносят важный вклад, все еще остается. PROMPT полиаденилированы и более значительно стабилизируются, чем мРНК, при инактивации экзосом (5,9).Чтобы проверить, приводят ли стабилизированные PROMPT к накоплению очагов полиА, мы истощили компоненты NEXT RBM7 и ZCCHC8 по отдельности или в комбинации (рисунок). В этих нокдаун клетках, хотя накопление всех полиаденилированных PROMPT, которые мы тестировали, было сравнимо с таковым при нокдауне RRP40, накопления полиА РНК не наблюдалось (рисунок -). Вероятно, это связано с низким содержанием PROMPT даже после стабилизации. В подтверждение этой возможности в клетках, инактивированных экзосомами, популяция считывания PROMPT составляет лишь одну десятую от популяции мРНК (рисунок).Эти данные предполагают, что накопленные PROMPT не объясняют главную причину увеличения сигналов полиА, которые мы наблюдали в клетках, инактивированных экзосомами.

Образование фокусов полиА при инактивации экзосом происходит не в основном из-за накопления субстратов TRAMP, NEXT или ZFC3h2. ( A ) Вестерн-блоттинг показывает, что компоненты NEXT эффективно разрушаются. Тубулин используется в качестве контроля нагрузки. ( B ) PROMPT накапливаются аналогичным образом в клетках нокдауна RRP40 и NEXT.Клетки HeLa трансфицировали контрольными миРНК RRP40, RBM7, ZCCHC8 и RBM7 / ZCCHC8 через 72 часа после трансфекции, получали полиА-РНК с последующим RT-qPCR с наборами праймеров, которые специфически амплифицируют указанные PROMPT. R7 и Z8 представляют собой RBM7 и ZCCHC8 соответственно. Столбики показывают уровни РНК относительно GAPDH. Планки ошибок представляют собой стандартные отклонения от биологических повторов ( n = 3). Статистический анализ проводился с использованием критерия Стьюдента t . * P <0.05, ** P <0,01, *** P <0,001. ( C ) Распределение полиА РНК в клетках с нокдауном NEXT не влияет. Клетки HeLa, трансфицированные указанными siRNA, использовали для анализа FISH для наблюдения за распределением polyA РНК. Окрашивание DAPI служило маркером ядра. ( D ) Количественная оценка ядерных сигналов полиА РНК FISH от 30 клеток в каждом эксперименте с помощью изображения J. Полоса ошибок представляет стандартные отклонения от трех биологических повторов. *** P <0.001. ( E ) Относительное количество считываний PROMPT и мРНК в клетке с нокдауном MTR4. ( F ) Результаты вестерн-блоттинга показывают, что компоненты TRAMP были эффективно разрушены. Тубулин используется в качестве контроля нагрузки. ( G ) То же, что (C), за исключением того, что для этого эксперимента использовали клетки для нокдауна TRAMP. ( H ) Количественная оценка ядерных сигналов полиА РНК FISH от 30 клеток в каждом эксперименте с помощью изображения J. Полоса ошибок представляет стандартные отклонения от трех биологических повторов.Статистический анализ проводился с использованием критерия Стьюдента t . *** P <0,001. ( I ) RT-qPCR для изучения эффективности подавления ZFC3h2. Планки ошибок представляют собой стандартные отклонения от биологических повторов ( n = 3). Статистический анализ проводился с использованием критерия Стьюдента t . *** P <0,001. ( J ) RT-qPCR для исследования уровней транскрипта SNHG в контрольных, нокдаун-клетках MTR4 и ZFC3h2. Столбики показывают уровни РНК относительно 18S рРНК.Планки ошибок представляют собой стандартные отклонения от биологических повторов ( n = 3). Статистический анализ проводился с использованием критерия Стьюдента t . ** P <0,01, *** P <0,001. ( K ) FISH-анализ распределения полиА РНК в клетках с нокдауном ZFC3h2. (Левая панель) Клетки HeLa, трансфицированные миРНК ZFC3h2, использовали для анализа FISH для наблюдения за распределением полиА РНК. Окрашивание DAPI служило маркером ядра. (Правая панель) Количественная оценка ядерных сигналов полиА-РНК FISH от 30 клеток в каждом эксперименте с помощью Image J.Планка погрешностей представляет собой стандартные отклонения от трех биологических повторов. *** P <0,001. ( L ) Накопленные в ядрах полиА-РНК в клетках с нокдауном ZFC3h2 совместно локализуются с NS, FISH проводили с использованием 70 (н.о.) олиго-dT-зонда и проводили IF с использованием антитела SC35. Конфокальная микроскопия использовалась для визуализации клеток.

Также возможно, что PAPD5, который, как полагают, представляет собой поли-А-полимеразу в человеческом TRAMP-комплексе, добавляет короткий поли-А-хвост к экзосомным мишеням, которые обычно не полиаденилированы, что приводит к усилению сигналов поли-А при инактивации экзосом.Однако нокдаун PAPD5 не повлиял на накопление ядерной полиА РНК в клетках, истощенных по MTR4 (Рисунок -). Соответственно, одиночный или двойной нокдаун PAPD5 и другого компонента TRAMP, ZCCHC7, не приводил к накоплению ядерной полиА РНК (Рисунок -). Эти результаты предполагают, что субстраты TRAMP не вносят важный вклад в усиление сигналов полиА.

Недавние исследования показали, что MTR4 вместе с ZFC3h2 участвует в деградации длинных транскриптов и нестабильных коротких РНК (7,8).Чтобы проверить, могли ли эти РНК вызывать накопление полиА-фокусов при инактивации экзосом, мы истощили ZFC3h2. Как и ожидалось, истощение ZFC3h2 привело к явному накоплению РНК SNHG (рисунок и) (7). Хотя ядерные полиА-РНК FISH-сигналы были повышены в этих нокдаун-клетках, в отличие от тех, которые обнаруживаются в клетках с истощенными экзосомами, эти РНК, по-видимому, были локализованы совместно с SC35 (фиг. И). Причина этого повышенного уровня ядерных сигналов полиА РНК остается неясной. Одна возможность состоит в том, что стабилизированные транскрипты SNHG и нестабильные РНК конкурируют с мРНК за механизм ядерного экспорта, что приводит к частичному удержанию ядерной мРНК.Альтернативно, повышенная флуоресценция может быть результатом мишеней ZFC3h2, которые накапливаются в NS. Тем не менее, этот результат не подтверждает возможность того, что фокусы полиА, обнаруженные при инактивации экзосом, в основном образованы мишенями ZFC3h2. Вместе с данными polyA RNA-seq, мРНК-мишени экзосом, вероятно, вносят наиболее важный вклад в ядерные фокусы полиА, накапливаемые при инактивации экзосом, хотя по-прежнему возможно, что некоторые РНК-мишени NEXT, TRAMP и ZFC3h2 также накапливаются в этих фокусах.

Экзосомные мРНК мишени в основном не деградируют в NS.

Накапливающиеся данные указывают на то, что большинство мРНК проходит через NS перед ядерным экспортом (14-19). Наблюдение за тем, что мРНК мишени экзосом не накапливаются в NSs, повысило вероятность того, что эти мРНК могут не деградировать в основном в этих доменах. Однако также возможно, что экзосомальная деградация действительно происходит внутри NS, и когда экзосома инактивирована, накопленные мишени высвобождаются из NS в нуклеоплазму.В этом случае можно было бы ожидать, что нацеливание мРНК-мишени экзосомы на NS снижает ее стабильность. Чтобы проверить это, мы использовали элемент РНК (элемент, направленный на спекл, STE), который нацелен на мРНК репортера cG (транскрипт кДНК β-глобина), мишень экзосомы, которая в противном случае не связывается с NS (14), в эти субъядерные домены. Примечательно, что нацеливание на спеклы не уменьшало, а, по-видимому, увеличивало уровень мРНК cG (рисунок, левая панель), что позволяет предположить, что нацеливание на спеклы стабилизирует мРНК-мишени экзосом.Чтобы проверить, связана ли эта стабилизация с предотвращением экзосомальной деградации, мы сравнили чувствительность мРНК cG и cG-STE к нокдауну MTR4. Важно отметить, что мРНК cG-STE (увеличение в 1,4 раза) была явно менее чувствительной, чем мРНК cG (увеличение в 2,7 раза), что указывает на то, что нацеливание на спекл повышает стабильность мРНК, предотвращая деградацию экзосом (рисунок, правая панель). Оставшаяся чувствительность мРНК cG-STE может быть связана с ее неполным нацеливанием на спеклы. В совокупности наши данные подтверждают мнение, что мРНК мишени экзосом в основном деградируют в нуклеоплазме, но не в NSs.

МРНК-мишени экзосом в основном разрушаются перед прохождением через NS. ( A ) Спекл-нацеливание мРНК cG предотвращает деградацию экзосом. RT-qPCR для изучения уровней мРНК cG или cG-STE в нормальных клетках HeLa (левая панель) или в контрольных клетках и клетках с нокдауном MTR4 (правая панель). ( B ) Нокдаун PABPN1 и UAP56 ингибируют высвобождение мРНК из NS. Конфокальная микроскопия использовалась для изучения распределения полиА РНК в контрольных, нокдаун-клетках PABPN1 и UAP56.SC35 использовался для маркировки NS. ( C ) RT-qPCR для исследования уровней указанных мРНК из клеток HeLa, обработанных контрольными миРНК, MTR4, PABPN1 или UAP56 / URh59. Относительные уровни указанных РНК по отношению к 18S рРНК были количественно определены и указаны на графике. Планки ошибок представляют собой стандартные отклонения от биологических повторов ( n = 3). Статистический анализ проводился с использованием критерия Стьюдента t . * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0.001. ( D ) Две возможности в сайтах накопления мРНК-мишени экзосом, когда высвобождение мРНК из NS ингибируется. (I) они будут накапливаться как внутри, так и вне NS, если деградация происходит до попадания в NS; (II) они будут накапливаться исключительно внутри NS, если деградация происходит после высвобождения из NS. ( E ) (Вверху) Конфокальную микроскопию использовали для изучения совместной локализации полиА РНК с NS в контроле, MTR4, MTR4 / PABPN1 и MTR4 / UAP56 нокдаун клеток.(Внизу) Количественная оценка фокусов полиА, которые не локализуются совместно с SC35 в каждой ячейке. Для анализа каждого образца использовали тридцать ячеек. ( F ) Истощение MTR4 приводит к цитоплазматическому накоплению транскриптов cG и cS. (Вверху) Репортерную конструкцию cG или cS вводили в ядра контрольных клеток и клеток с нокдауном MTR4 с последующим FISH с использованием векторного зонда для определения распределения соответствующей мРНК через 2 часа после инъекции. Для всех изображений была сделана одинаковая экспозиция.На изображениях-вставках показан маркер инъекции. Окрашивание DAPI служило маркером ядра. (Внизу) Количественная оценка ядерных и цитоплазматических сигналов FISH соответствующей мРНК. Отношения N / C определяли для 30 клеток в каждом эксперименте. N и C обозначают ядерные и цитоплазматические сигналы FISH соответственно. Планки погрешностей, стандартные отклонения ( n = 3). *** P <0,001. ( G ) (Вверху) Репортерную конструкцию cS вводили в ядра клеток с нокдауном MTR4 и MTR / UAP56 с последующим FISH для определения распределения соответствующей мРНК через 2 часа после инъекции.Для всех изображений была сделана одинаковая экспозиция. На изображениях-вставках показан маркер инъекции. Окрашивание DAPI служило маркером ядра. (Внизу) Количественная оценка ядерных и цитоплазматических сигналов FISH cS мРНК. Отношения N / C определяли для 30 клеток в каждом эксперименте. N и C обозначают ядерные и цитоплазматические сигналы FISH соответственно. Планки погрешностей, стандартные отклонения ( n = 3). *** P <0,001. ( H ) Накопленная в ядре мРНК cS в клетках с нокдауном MTR4 / UAP56 частично совмещается с NS.Были выполнены FISH с векторным зондом и IF с использованием антитела SC35.

Экзосомная деградация в основном происходит до прохождения мРНК через NS.

Затем мы спросили, когда происходит деградация экзосомальной мРНК, до проникновения NS или после высвобождения? В последнем случае блокирование высвобождения мРНК из NS будет ослаблять деградацию экзосомальной мРНК. Предыдущие исследования показали, что PABPN1 необходим для ядерного экспорта полиА РНК (26,27). В соответствии с этими исследованиями полиА РНК накапливались в ядрах клеток, истощенных по PABPN1 (рисунок).В отличие от исследования, показывающего, что накопленные полиА-РНК лишь частично обнаруживаются в НП в клетках U2OS (27), мы обнаружили, что эти РНК были хорошо локализованы вместе с SC35 в клетках HeLa (рисунок), что позволяет предположить, что высвобождение мРНК из НП было подавлено. Причина этого несоответствия может быть связана с различием клеточных линий. В клетках с нокдауном PABPN1 семь из восьми исследованных нами РНК-мишеней показали неизмененные уровни (рисунок). Кроме того, чтобы изучить влияние нокдауна PABPN1 на уровни мРНК-мишени экзосомы в масштабе всего генома, мы выполнили RNA-seq в RRP40 и MTR4-истощенных тотальных клетках и сравнили с опубликованными данными RNA-seq для нокдауна PABPN1 (28).Только ~ 7% мРНК-мишеней экзосом, по-видимому, накапливались после нокдауна PABPN1 (дополнительный набор данных S1). Эти данные предполагают, что блокирование высвобождения мРНК из NS не влияет на деградацию экзосомальной мРНК. Однако также возможно, что высвобождение мРНК не было сильно блокировано истощением PABPN1. Таким образом, мы истощили UAP56, что привело к почти полной блокировке мРНК в NS и, по-видимому, к увеличению NS (14) (рисунок). Примечательно, что истощение UAP56 не стабилизирует мРНК-мишени экзосом, но приводит к снижению их уровней (рисунок).Принимая во внимание важную роль UAP56 в привлечении ALYREF (20), это снижение, вероятно, было связано с неэффективным привлечением ALYREF и усилением связывания MTR4 с последующей деградацией экзосом. В подтверждение этой возможности совместное истощение RRP40 с UAP56 восстанавливает эти сниженные уровни мРНК (дополнительный рисунок S4). Эти результаты вместе указывают на то, что блокирование высвобождения мРНК не ослабляет деградацию мРНК-мишени экзосом, и предполагают, что мРНК-мишени экзосомы могут быть расщеплены до попадания в NS.

Мы рассудили, что когда высвобождение мРНК из NS ингибируется, мРНК-мишени экзосомы будут обнаруживаться (i) как внутри, так и вне NS, если деградация происходит раньше NSs; (ii) исключительно внутри NS, если деградация происходит после NS (рисунок). Чтобы дополнительно различать эти возможности, мы исследовали распределение полиА РНК в клетках, истощенных или совместно истощенных с контролем, MTR4, MTR4 / PABPN1 и MTR4 / UAP56. В соответствии с нокдауном экзосомы при истощении MTR4 полиА РНК, по-видимому, накапливались в ядерных фокусах, которые не локализуются совместно с SC35 (рисунок).Интересно, что в клетках с совместным нокдауном MTR4 / PABPN1, хотя большая часть полиА РНК накапливалась в NS, в среднем 12 фокусов полиА не локализуются совместно с SC35 в каждой клетке (рисунок). Аналогичное наблюдение было получено с клетками совместного нокдауна MTR4 / UAP56. Относительно менее очевидные очаги полиА вне NS в этих ко-нокдаун клетках по сравнению с нокдауном MTR4, возможно, могут быть из-за частичного перекрытия с увеличенными NS. Тем не менее, эти результаты вместе показывают, что экзосомальная деградация в основном происходит до того, как мРНК проходят через NS.

Экспортно-дефектные мРНК, которые не проходят через NS, накапливаются в цитоплазме после инактивации экзосом

Данные, описанные выше, предполагают, что до проникновения NSs судьба мРНК для ядерного экспорта и деградации была определена. Если это так, то входящие NSs не будут необходимы для переключения судьбы мРНК-мишеней экзосом с деградации на экспорт при истощении MTR4. Чтобы проверить эту возможность, мы исследовали влияние истощения MTR4 на ядерно-цитоплазматическое распределение мРНК cG, которая не может проникать в NS или эффективно экспортироваться в нормальные клетки (14,24).Как и ожидалось, мРНК cG была в основном распределена в ядрах контрольных клеток (рисунок). Напротив, в клетках с нокдауном MTR4 было обнаружено явное скопление цитоплазмы (рисунок), что позволяет предположить, что произошел ядерный экспорт. Когда мРНК cS, которая также является экспортно-дефектной и не проникает в NS, была использована для этого анализа, были получены аналогичные результаты (рисунок) (14,24). Эти результаты показывают, что прохождение через NS не требуется для экспортно-дефектных мРНК, отсортированных от правильно экспортированных в нормальных клетках.Чтобы определить, экспортируются ли мРНК-мишени экзосомы через обычный путь экспорта после нокдауна MTR4, мы совместно нокаутировали MTR4 / UAP56. Как показано на фигуре, мРНК cS была полностью заблокирована в ядрах этих клеток с одновременным нокдауном. Интересно, что в значительной части (75%) этих клеток мРНК cS частично накапливались в NS (рисунок). Эти спекл-сохраненные мРНК cS в клетках с одновременным нокдауном MTR4 / UAP56 могут соответствовать тем, которые экспортируются в цитоплазму в клетках с нокдауном MTR4. Этот результат указывает на то, что мРНК-мишени экзосом могут экспортироваться через NS в клетки, инактивированные экзосомами.Вместе наши данные подтверждают мнение, что судьба мРНК для ядерного экспорта или деградации определяется до попадания в NSs.

ОБСУЖДЕНИЕ

мРНП, собранные в ядре, находятся под строгим контролем качества, что приводит к быстрой деградации неправильно / неэффективно обработанных и собранных мРНП и ядерному экспорту эффективно обработанных и собранных. Конкуренция между адаптером экспорта мРНК ALYREF и кофактором экзосомы MTR4 обеспечивает важный механизм для сортировки аберрантных мРНП от экспортно-компетентных.Важным остающимся вопросом является то, где и когда судьба мРНП для ядерного экспорта и деградации определяется в ядре.

В этой работе наши данные предполагают, что деградация экзосомальной мРНК в основном происходит в нуклеоплазме до того, как мРНК попадают в NS (см. Модель на рисунке). Мы показываем, что после инактивации экзосом его мРНК-мишени накапливаются в нуклеоплазматических фокусах вне NSs, предполагая, что деградация экзосомальной мРНК в основном не происходит в этих субъядерных структурах. В самом деле, перемещение мРНК мишеней экзосом в NS ингибирует их экзосомальную деградацию.Более того, многочисленные доказательства подтверждают мнение о том, что мРНК-мишени экзосом деградируют до попадания в NS и после инактивации экзосом эти мРНК могут медленно проникать в NS и экспортироваться.

Определение судьбы мРНК для экспорта и деградации в основном происходит до того, как мРНК попадают в NS. Слева, в нормальных клетках, на мРНК, ALYREF и MTR4 конкурируют за связывание с CBC. Если ALYREF побеждает MTR4, мРНК затем входит в NS, где она может дополнительно рекрутировать ALYREF через другие механизмы, а также другие компоненты TREX.После выхода из NS мРНК экспортируется в цитоплазму. В случае, если MTR4 превосходит ALYREF, мРНК затем разрушается в нуклеоплазме. Правильно, в клетках, инактивированных экзосомами, мРНК-мишени экзосом в основном обнаруживаются в нуклеоплазме из-за их неэффективного рекрутирования ALYREF. Часть этих стабилизированных мРНК-мишеней постепенно экспортируется в цитоплазму через или не через NS.

При пересмотре работы Силла et al. (29) сообщил о подобном накоплении ядерных очагов полиА в клетках, инактивированных экзосомами.Они показали, что это накопление зависит от ZFC3h2, и предоставили доказательства, что ZFC3h2 функционально конкурирует с ALYREF за сортировку РНК для экспорта или деградации. В соответствии с этой точкой зрения, Ogami et al. , (8) продемонстрировали, что uaRNAs и ptRNAs-мишени экзосом накапливаются в полисомах в клетках, истощенных по MTR4 / ZFC3h2. Таким образом, кажется вероятным, что экзосома использует преимущества различных кофакторов, чтобы конкурировать за связывание с мРНК как на 5′-, так и на 3′-концах, чтобы гарантировать максимальную эффективность захвата «аберрантных» мРНК.Есть как сходства, так и различия между нашими результатами и результатами Silla et al. (29). Напр., Мы обнаружили, что в дополнение к компонентам экзосом истощение MTR4 также приводит к очевидному накоплению полиА РНК вне NSs. Кроме того, после истощения MTR4, хотя часть накопленных РНК-мишеней экзосом экспортировалась в цитоплазму, значительная часть все еще обнаруживается в ядре, что позволяет предположить, что эти накопленные мРНК не могут эффективно рекрутировать факторы ядерного экспорта.Эти результаты согласуются с данными Ogami et al. , (8) показывает, что нестабильные РНК накапливаются как в ядре, так и в цитоплазме. Также мы обнаружили, что истощение PABPN1, который вместе с MTR4 и ZFC3h2 формирует комплекс PAXT, приводит к частичной релокализации мРНК мишеней экзосом в NSs. Наконец, наши данные подтверждают, что мРНК мишени экзосом сортируются на деградацию перед попаданием в NSs, и это быстрое удаление важно для предотвращения экспорта мРНК мишеней экзосом в ядро.

На первый взгляд, накопление мРНК в ядре после истощения MTR4 может показаться противоречащим представлению о том, что MTR4 и ALYREF конкурируют, чтобы определить свою судьбу за экспорт или деградацию (9). Мы полагаем, что такие, казалось бы, противоречивые результаты могут быть вызваны следующими причинами. На зрелых мРНК рекрутирование ALYREF, вероятно, будет режимом по умолчанию, вероятно, из-за его связи с процессингом пре-мРНК (10,30,31). В нормальных клетках мРНК, которые были эффективно обработаны и / или имеют сильные экспортные элементы, быстро рекрутируют ALYREF и эффективно экспортируются.мРНК, которые неправильно или неэффективно процессируются или не имеют сильного экспортного элемента, не могут эффективно рекрутировать ALYREF, что приводит к связыванию MTR4 и последующему привлечению экзосом для деградации. В случае нокдауна MTR4 низкая способность этих «дефектных» мРНК рекрутировать факторы экспорта мРНК остается неизменной. Поскольку экзосомальная деградация ингибируется, эти мРНК получают гораздо больше времени и шансов связываться с ALYREF и медленно экспортироваться. Однако этот экспорт не может быть очень эффективным, и значительная часть мРНК, вероятно, все еще остается в ядре.Соответственно, РНК-мишени экзосом накапливались как в ядре, так и в цитоплазме при инактивации экзосом (8,9). Кроме того, хотя ядерный экспорт временно транскрибируемых экзосом-мишеней, мРНК cG и cS, по-видимому, значительно усиливается после нокдауна MTR4, они все же, по-видимому, обнаруживаются в ядре (рисунок). Также возможно, что ZFC3h2 функционирует в ядерном удерживании мРНК-мишеней экзосом, как и в случае нестабильных РНК (8,29). Необходимы дальнейшие исследования для изучения того, как MTR4-CBC и ZFC3h2 / MTR4-PABPN1 взаимодействуют друг с другом, чтобы отсортировать РНК-мишени экзосом от правильно экспортированных.

Учитывая, что мРНК были переданы для экспорта до входа в NS, а именно ALYREF был рекрутирован через CBC, почему они проходят через эти домены? Хотя определение судьбы на ранней стадии для экспорта гарантирует предотвращение деградации экзосомальной мРНК, сборка экспортно-компетентных мРНП, возможно, в основном происходит в NS (см. Модель на рисунке). В поддержку этой точки зрения, ALYREF и многие др. Факторы экспорта мРНК сконцентрированы в NSs (10-13). В клетках ALYREF не только рекрутируется в 5′-область посредством CBC, но также связывает 3′-область PABPN1-зависимым образом и среднюю область зависимым от последовательности способом (21,30,32).Возможно, что связывание ALYREF с этими регионами может происходить в NS (см. Модель на рисунке). Другая возможность состоит в том, что входящие NS могут избежать постоянной конкуренции MTR4 с ALYREF за мРНК, судьба которых была определена для ядерного экспорта.

Быстрое удаление РНК-мишени экзосом может быть важным для предотвращения напрасной траты факторов процессинга ядерной РНК на функциональные РНК и ограничения шансов на экспорт аберрантных РНК. В подтверждение этого, при инактивации экзосом, экспортно-дефектные мРНК, а также обычно нестабильные РНК могут экспортироваться в цитоплазму (рисунок) (8).С одной стороны, эти РНК также могут конкурировать с функциональными мРНК за аппарат трансляции в цитоплазме, как Ogami et al. , описанный для нестабильных РНК (8). С другой стороны, аберрантные процессированные мРНК с нарушенными рамками считывания могут вызывать цитоплазматическую токсичность через свой продукт трансляции.

Природа ядерных фокусов, в которых накапливаются мРНК-мишени экзосомы, остается неясной. Одна возможность состоит в том, что они являются сайтами деградации мРНК-мишеней экзосом.Альтернативная возможность состоит в том, что мРНК мишеней экзосом не разрушаются в этих фокусах, а образуют агрегаты в нуклеоплазме, когда экзосома инактивирована. Дальнейшие исследования необходимы для расшифровки механизма образования этих фокусов полиА.

workzilla.com ▷ Статистика веб-сайта и онлайн-инструменты

#
# ARIN Данные и услуги WHOIS регулируются Условиями использования
#, доступными по адресу: https://www.arin.net/whois_tou.html
#
# Если вы видите неточности в результатах, сообщите об этом по телефону
# https: // www.arin.net/resources/whois_reporting/index.html
#
# Copyright 1997-2018, American Registry for Internet Numbers, Ltd.
#

Номер AS: 13335
ASName: CLOUDFLARENET
ASHandle: AS13335
RegDate: 2010-07- 14
Обновлено: 2017-02-17
Комментарий: Все отчеты о злоупотреблениях Cloudflare можно делать через https://www.cloudflare.com/abuse
Ссылка: https://rdap.arin.net/registry/autnum/13335

OrgName: Cloudflare, Inc.
OrgId: CLOUD14
Адрес: 101 Townsend Street
Город: Сан-Франциско
StateProv: CA
Почтовый код: 94107
Страна: US
Дата регистрации: 2010-07-09
Обновлено: 2017-02-17
Комментарий: Все отчеты о злоупотреблениях Cloudflare могут быть сделаны через https: // www.cloudflare.com/abuse
Ссылка: https://rdap.arin.net/registry/entity/CLOUD14

OrgTechHandle: ADMIN2521-ARIN
OrgTechName: Admin
OrgTechPhone: + 1-650-319-8930
OrgTechEmail: rir @ cloudflare.com
OrgTechRef: https://rdap.arin.net/registry/entity/ADMIN2521-ARIN

OrgAbuseHandle: ABUSE2916-ARIN
OrgAbuseName: Abuse
OrgAbusePhone: + 1-650-319-8930
Email OrgAbuse cloudflare.com
OrgAbuseRef: https://rdap.arin.net/registry/entity/ABUSE2916-ARIN

OrgNOCHandle: NOC11962-ARIN
OrgNOCName: NOC
OrgNOCPhone: + 1-650-319-8930
OrgNOC облачная вспышка.com
OrgNOCRef: https://rdap.arin.net/registry/entity/NOC11962-ARIN

RNOCHandle: NOC11962-ARIN
RNOCName: NOC
RNOCPhone: + 1-650-319-8930
RNOCEmail: noc @ cloudflare. com
RNOCRef: https://rdap.arin.net/registry/entity/NOC11962-ARIN

RTechHandle: ADMIN2521-ARIN
RTechName: Admin
RTechPhone: + 1-650-319-8930
RTechEmail: rir @ cloudflare. com
RTechRef: https://rdap.arin.net/registry/entity/ADMIN2521-ARIN

RAbuseHandle: ABUSE2916-ARIN
RAbuseName: Abuse
RAbusePhone: + 1-650-319-8930
RAbuseEmail: abuse @ cloudflare.com
RAbuseRef: https://rdap.arin.net/registry/entity/ABUSE2916-ARIN

#
# ARIN Данные и услуги WHOIS регулируются Условиями использования
#, доступными по адресу: https: //www.arin .net / whois_tou.html
#
# Если вы видите неточности в результатах, сообщите об этом по адресу
# https://www.arin.net/resources/whois_reporting/index.html
#
# Copyright 1997-2018, American Реестр Интернет-номеров, ООО
#

Home — PSI Learning Academy

Чтобы помочь нашим участникам тестирования добиться успеха, PSI создала Академию PSI Learning Academy *.PSI предоставляет портал, через который кандидаты могут искать решения для повышения квалификации до и после тестирования и повышения квалификации во многих отраслях.
Learning Academy перенаправляет участников на наши стандартные и расширенные практические тесты. Наши поставщики услуг по обучению предлагают широкий спектр наименований с содержанием, охватывающим предварительное лицензирование, подготовку к экзаменам и обучение, а также непрерывное образование. Все курсы онлайн, просты в использовании, удобны и доступны 24 часа в сутки, 7 дней в неделю с поддержкой клиентов в режиме реального времени.Найдите практический тест или курс, выбрав свой штат на боковой панели или конкретную отрасль в раскрывающемся списке. PSI специализируется на недвижимости, страховании, генеральном подрядчике, строительстве и торговле. Если вы предоставляете образование в рамках одной из вертикалей, предлагаемых кандидатам PSI, и хотели бы, чтобы вас рассматривали для добавления в Академию обучения PSI или у вас есть какие-либо другие вопросы, свяжитесь с [email protected]

Практические тесты: краткий обзор

PSI предлагает комплексные практические тесты для различных профессий, включая недвижимость, страхование, строительство и косметологию.Практические тесты разработаны, чтобы убедиться, что вы как можно более подготовлены до даты вашего лицензионного теста. Каждый тест охватывает области контента, которые обычно встречаются в фактическом тестировании лицензирования, проводимом PSI.
Мы постоянно работаем над тем, чтобы предоставить нашим участникам тестирования наилучшие доступные варианты. Для ряда профессий, в дополнение к нашим стандартным практическим тестам, мы можем предложить практические тесты премиум-класса, которые включают случайную комбинацию вопросов, выбранных из пула до 500.Практические тесты Premium предоставляют вам возможность пересдавать тест неограниченное количество раз в течение 90 дней. Наши стандартные практические тесты состоят из фиксированного количества вопросов с возможностью однократного тестирования.
Каждый практический тест, который предоставляет PSI, включает в себя подробный отчет с оценками и анализ ваших ответов с разбивкой по каждому вопросу относительно правильного ответа. Независимо от того, выберете ли вы стандарт или премиум, мы уверены, что практические тесты PSI помогут вам в достижении ваших целей. Если у вас есть какие-либо вопросы или вам нужна помощь с любым из наших тестов, сотрудники нашей службы поддержки всегда готовы помочь.Обратитесь в службу поддержки клиентов по адресу [email protected]

Информация о практическом тесте премиум-класса

Практические тесты

Premium позволяют выбрать один из двух различных режимов: тестирование и обучение. Независимо от того, какой режим вы выберете, у вас будет доступ к отличным отчетам о каждой попытке. Вы не только увидите свои результаты по каждому вопросу, но и увидите все, разбитое по темам и подтемам, как в схеме теста на лицензирование. Это поможет вам почувствовать сильные стороны и темы, которые могут потребовать дополнительного внимания.

В режиме тестирования вы активируете несколько вопросов из пула и таймер, основанный на продолжительности фактического теста, чтобы помочь вам узнать время наступления дня теста. Вы можете практиковаться несколько раз и каждый раз видеть новый набор вопросов (как только вы увидите большинство вопросов, вы увидите их повторение).

В режиме обучения нет таймера, и вы увидите объяснение / язык обучения для каждого вопроса, чтобы помочь вам понять правильный ответ.

Pittsfield ma подключение

Het частный иностранный возраст контакт кота. Мальчики также могут скрещиваться с саном на Nintendo и знаменитостях.
Ведьминский романс Корейская драма, Ведьминский романс, Ведьминская любовь, Все корейские Питтсфилд ма встреча драма. Повсеместное распространение такого поведения имеет важные последствия для компаний, пытающихся расширить свою бизнес-базу в Индии, и требует большого количества тяжелой работы. Американские разработчики находятся в феноменальные дни и отзываются последними.
Что говорят наши участники по всему миру Доллары, которые мы находим на берегу моря Кортеса, больше не живы; они белые, выбеленные солнцем, и остановились на мне. Свидания — это выбор, и это именно то, что предлагает WeLoveDates, выбор многих бесплатный.
Сколько вам сейчас лет? Видели заголовок профиля на сайте знакомств? Кейт Балестриери, я не могу сузить радиус до менее 50 миль. что означает null на сайтах знакомств Thai Dating and Singles at ™.На дистанции есть случайные брендовые девушки каждого дома. buenavista бесплатные местные секс-сайты бесплатные секс-сайты в чадвелл-хит питтсфилд ма подключение BPT колледжи в Бангалоре, финансовые учреждения. Badoo — это хорошо известный и огромный сайт / приложение знакомств, которое существует уже несколько лет. index лучшие бисексуальные знакомства приложения связи знакомства остин афера
номер подключения колледжа Tinder.
Это заставляет меня смеяться каждый раз, когда я это вижу. Смешные цитаты о свиданиях, Смешные мемы о свиданиях, Смешные цитаты.До сегодняшнего дня скандал, связанный с работой в фургоне, был решением Fortis встречаться со спортсменами и странными младенцами в финале на подозреваемых в miserantis чиновниках. Используется интеллектуальный метод сватовства. женщины, живущие со своими парнями, не состоящими в браке, подключаются к свиданиям скачать приложение java Главная Почему женщины используют сайты знакомств 5 советов по свиданиям для девушек (с точки зрения христианского парня) · 1. ищу секс в местных службах знакомств на южной реке, которые являются бесплатными сайтами знакомств для взрослых. Это бесплатное время стало ключевым, и я бы пригласил двусторонних пользователей просматривать изменения с еженедельного сайта диапазона, начального матча или лица и использовать его, чтобы получить доступ к этой отметке.В Вашингтоне взрослым (лицам 18 лет и старше) запрещено заниматься сексом с несовершеннолетними (лицами моложе 16 лет), даже если секс осуществляется по обоюдному согласию. Солнечный фильм), Википедия.

Криминалистический анализ WeChat на смартфонах Android

Digital Investigation 21 (2017) 3e10

Списки содержания доступны на ScienceDirect

Домашняя страница журнала Digital Investigation: www.elsevier.com/locate/diin

DFRWS USA 2016 d Труды 16-й Ежегодной конференции по исследованиям цифровой криминалистики в США

Криминалистический анализ WeChat на смартфонах Android Songyang Wu, Yong Zhang, Xupeng Wang, Xiong Xiong *, Lin Du Третий научно-исследовательский институт Министерства общественной безопасности, Шанхай, 201204, Китай

articleinfo

аннотация

История статьи: Поступила 13 июня 2016 г. Поступила в измененная форма 11 ноября 2016 г. Принята 20 ноября 2016 г. Доступна онлайн 7 января 2017 г.

WeChat — одно из самых популярных в мире приложений для обмена мгновенными сообщениями для смартфонов.В конце 2015 года у WeChat было 697 миллионов активных пользователей в месяц из более чем 200 стран. Хотя WeChat изначально был разработан для общения между родственниками и друзьями, его многочисленные социальные функции теперь также используются преступниками для общения и даже для организации и координации преступных действий. Таким образом, записи сообщений социальных сетей, таких как WeChat, извлеченные из смартфонов преступников, всегда являются жизненно важными цифровыми доказательствами для расследования и судебного преследования уголовных дел.В настоящее время лишь несколько публикаций посвящены криминалистике WeChat. В этом документе описывается несколько общих вопросов, которые возникают при судебно-медицинской экспертизе Android WeChat, и предлагаются соответствующие технические методы, которые полезны для решения этих вопросов. Этот документ призван предоставить важные ссылки для следователей и исследователей, работающих в области цифровой криминалистики. © 2017 Elsevier Ltd. Все права защищены.

Ключевые слова: Криминалистическая экспертиза WeChat Криминалистическая экспертиза смартфонов Android Цифровая криминалистическая экспертиза

Введение WeChat — одно из самых популярных в мире приложений для обмена мгновенными сообщениями для смартфонов.Через Интернет пользователи WeChat могут общаться друг с другом с помощью мультимедийных сообщений, включая тексты, изображения, голоса и видео. Они также могут использовать такие сервисы, как WeChat Moments и Официальные учетные записи, для обмена и публикации информации. Согласно статистике из ежегодных отчетов Tencent о производительности1, количество активных пользователей WeChat в месяц на конец 2015 года достигло 697 миллионов из более чем 200 стран, говорящих на более чем 20 языках. В частности, WeChat — мобильное приложение для обмена мгновенными сообщениями с наибольшим количеством китайских пользователей.Изучение криминалистики WeChat становится все более важным, поскольку связи между службами социальных сетей (SNS) и повседневной жизнью людей выросли. В частности, WeChat можно использовать в качестве средства связи для преступной деятельности, и банды могут даже использовать его многочисленные социальные функции для организации и координации своих преступных действий. Более того, преступники могут осуществлять различные виды преступной деятельности через WeChat, например, продавать незаконные предметы (например, наркотики и оружие), кражи, распространение порнографических материалов среди детей и т. Д.Записи активности в социальных сетях, полученные со смартфонов подозреваемых в совершении уголовных преступлений, часто содержат доказательства

, имеющие прямое отношение к противоправным преступным действиям. Эти записи могут сыграть жизненно важную роль в расследовании и судебном преследовании дел. Поэтому совершенно необходимо изучить технические методы исследования приложений социальных сетей, таких как WeChat. На следующих рисунках (рис. 12) показаны две основные функции WeChat. Рис. 1 (a) — это экран чата, а рис. 1 (b) — моменты, когда пользователи делятся своей жизнью с друзьями.Сообщения WeChat содержат различную информацию, включая текст, смайлики, голос, видео и изображения. Среди них нетекстовые сообщения, такие как изображения и голоса, всегда имеют разное значение в разных разговорных контекстах. Таким образом, криминалистическое понимание последствий разговора в значительной степени зависит от того, можно ли полностью восстановить сцены чата (включая отображение всех нетекстовых сообщений). Мы используем термин «сцена» для обозначения контекстов беседы в чате, показанной на рис.1. В настоящее время технической литературы по криминалистике WeChat относительно мало. Основные продукты цифровой криминалистики, такие как Cellebrite, 3 Oxygen4 и XRY5, поддерживали криминалистику Android WeChat, некоторые еще в 2013 году. Однако восстановление сцены общения и сцены моментов ограничено6, и соответствующие технические детали все еще не опубликованы.

2

http://www.wechat.com. http://www.cellebrite.com. http://www.oxygen-forensic.com. 5 https://www.msab.com. 6 Мы провели тесты на Cellebrite UFED v3.9, XRY v6.15, XRY v7.1 и Oxygen forensic analyst v9.0. 3 4

* Автор, ответственный за переписку. Адрес электронной почты: [электронная почта защищена] (X. Xiong). 1 http://www.tencent.com/zh-cn/ir/reports.shtml. http://dx.doi.org/10.1016/j.diin.2016.11.002 1742-2876 / © 2017 Elsevier Ltd. Все права защищены.

4

S. Wu et al. / Digital Investigation 21 (2017) 3e10

Рис. 1. Две основные функции WeChat.

В этой статье исследуются общие вопросы, возникающие при исследовании WeChat на устройствах Android, включая: 1) как получить данные WeChat и как декодировать зашифрованную базу данных; 2) с кем общался пользователь и что было сказано, и 3) чем пользователь делился с Моментами.Мы также предлагаем полезные методы для решения распространенных проблем криминалистики WeChat, включая удобное резервное копирование пользовательских данных с некорневых устройств Android и достаточное восстановление сцены разговоров. Для оценки эффективности предложенных методов были проведены экспериментальные испытания на разных версиях WeChat и Android-смартфонах. Насколько нам известно, в немногих источниках криминалистическая технология WeChat обсуждалась так подробно, как наша. Исследователи и исследователи могли бы лучше понять реконструкцию действий, связанных с использованием WeChat на смартфонах Android.Связанные работы Большинство исследований криминалистических технологий Android сосредоточено на сборе и анализе данных смартфонов, полученных из флэш-памяти и оперативной памяти. Необходимые базовые знания, технологии и операционные методы были изложены Хугом (2011), который предоставил отличное руководство для судебно-медицинских экспертов. Vidas et al. ~ o et al. (2011) предложили относительно универсальную (2011) технологию Sima для сбора данных со смартфонов Android, включая криминалистику данных приложений. Sylve et al.(2012) разработали инструмент, который может выгружать и анализировать энергозависимую память устройств Android. Литературы Fairbanks (2012), Xu et al. (2013), Wu et al. (2013) разработали технологию восстановления удаленных файлов и записей SQLite на основе глубокого анализа файловой системы. В целом все вышеперечисленные схемы делают упор на сбор и анализ данных со смартфона. Криминалистический анализ приложений не является их фокусом, хотя он включает в себя некоторую криминалистическую экспертизу данных сторонних приложений.Фактически, методы криминалистического анализа

для сторонних приложений различаются из-за существенных различий в реализации. Таким образом, криминалистика приложений все еще требует дальнейшего изучения. В последнее время растет количество литературы, посвященной криминалистике приложений на смартфонах Android. Chung et al. (2012) и Martini et al. (2015) предложили криминалистическую и аналитическую схему для облачных приложений. Mutawa et al. (2012) рассмотрели криминалистические и аналитические технологии трех популярных приложений социальных сетей, а именно Facebook, Twitter и MySpace.Они также провели некоторую проверку на смартфонах Blackberry, iPhone и Android. Англано (2014) предложил метод извлечения и анализа истории чата в WhatsApp Messenger. Karpisek et al. (2015) предложили метод дешифрования сетевого трафика WhatsApp, а также технологию извлечения и анализа связанных данных связи. Из-за все более серьезного вредоносного программного обеспечения Li et al. (2012) и Allix et al. (2014) предложили судебно-медицинскую технологию для обнаружения и распознавания вредоносных приложений Android.Эти исследования показывают, что каждое приложение требует своего собственного уникального метода судебной экспертизы и что описанные в литературе технологии судебной экспертизы не могут быть просто скопированы для судебной и аналитической работы в WeChat. Чжоу и др. (2015) и Силла (2015) специально изучали судебно-медицинскую технологию WeChat. Чжоу и др. (2015) удалось извлечь зашифрованную и удаленную историю чатов в WeChat с помощью глубокого анализа структуры энергозависимой памяти Android. В работе Силла (Silla, 2015) тестовый телефон был логически отображен с помощью логических инструментов Android Debug Bridge (ADB) и Mobile Phone Examiner Plus (MPEþ).Достоверность и надежность результата теста, полученного каждым логическим инструментом, тщательно проверялась путем извлечения логического образа десять раз. В их выводе: из двух протестированных инструментов ADB восстановил все общие носители и загруженные файлы документов с отметками времени. Подобно работе Силлы, мы также логически извлекаем данные WeChat с помощью ADB. Чжоу и др. (2015) сосредоточились в основном на энергозависимой памяти для своей криминалистической экспертизы WeChat, тогда как

S. Wu et al. / Digital Investigation 21 (2017) 3e10

Схема, описанная в нашей статье, собирает данные через файловую систему, что является совершенно другим подходом к криминалистике.Что еще более важно, в этом документе предлагается метод восстановления всей сцены чата и метод резервного копирования для удобного извлечения данных WeChat в некорневых случаях, которые являются проблемами, которые вышеупомянутые схемы не решают должным образом. Было опубликовано несколько сообщений в блогах и статей7, касающихся расшифровки базы данных WeChat, они действительно объясняют схему шифрования Android WeChat и предоставляют доступные подходы к расшифровке. Кроме того, в Интернете выпущены два инструмента с открытым исходным кодом для расшифровки базы данных сообщений Android WeChat.8 Эти работы содержат полезные ссылки для разработки приложений для криминалистики. В настоящее время коммерческие продукты для криминалистической экспертизы мобильных устройств, такие как Cellebrite, XRY и Oxygen, поддерживают цифровое расследование в различных сторонних приложениях Android и могут извлекать данные из неуправляемых Android-смартфонов, используя определенные уязвимости загрузчика, существующие на многих устройствах. Эти продукты представляют проанализированные истории чатов в табличной форме и предоставляют исследователям соответствующие мультимедийные документы и необработанные базы данных SQLite для ручного анализа.Мы провели тесты на Cellebrite UFED v3.9, XRY v6.15, XRY v7.1 и Oxygen forensic analyst v9.0, восстановление сцен общения и сцен моментов ограничено. Никакие полностью восстановленные сцены чата или моменты не могут помешать полному пониманию последствий разговора. Согласно недавним примечаниям к выпуску продукта, опубликованным на официальном веб-сайте, Cellebrite UFED v5.0 поддерживает декодирование и анализ сообщений Android WeChat лучше, чем предыдущие версии. Однако соответствующие технические детали этих продуктов до сих пор не опубликованы.Криминалистическая экспертиза WeChat Необходимым процессом изучения судебной экспертизы Android WeChat является декомпиляция и понимание реализации этого приложения. Доступные аналитические инструменты включают Apktool, dex2jar, JD-GUI и т. Д. Основные направления обратного анализа WeChat, включая: извлечение информации о необходимых разрешениях, компонентах и ​​точках входа приложения; определение ключевых реализаций, включая процессы шифрования, генерацию ключей шифрования и схемы хранения данных с помощью инструментов декомпиляции, таких как BakSmali или JD-GUI.Однако мы лишь кратко описываем обратный анализ в качестве фона, так как он не является предметом настоящего исследования. Чтобы защитить конфиденциальность пользователей, WeChat шифрует базу данных сообщений чата с помощью SQLCipher.9 Более того, сбор данных с помощью функции резервного копирования Android запрещен после WeChat версии 6.0. Это приводит к затруднениям в судебной экспертизе WeChat на телефонах Android, которые необходимо решить в первую очередь. В этом разделе мы начинаем со сбора данных WeChat с устройств Android, в следующем подразделе рассматривается декодирование базы данных зашифрованных сообщений чата.Остальная часть этого раздела посвящена наиболее обеспокоенным проблемам следователей, которые проводят цифровую судебную экспертизу в приложении для обмена мгновенными сообщениями: 1) с кем общался пользователь и что было сказано, и 2) чем пользователь делился с Моментами. В целях изучения мы загружаем WeChat для Android версии 6.2. Однако реализации включают данные

7 http://www.acquireforensics.com/blog/wechat-forensics-analysis.html, http://www.cnblogs.com/pieces0310/p/4216182.html и https: //articles.forensicfocus. com / 2014/10/01 / decrypt-wechat-enmicromsgdb-database /. 8 https://github.com/ppwwyyxx/wechat-dump и http://code.nat.moe/view/ 1d1d30a1. 9 https://www.zetetic.net/sqlcipher/open-source.

5

шифрование и хранение данных одинаковы в различных версиях WeChat. Как показано в разделе «Результаты экспериментов», предлагаемый метод, разработанный на основе версии 6.2, также доступен в версиях от «5.0» до «6.3.27» (самая последняя версия WeChat на момент написания статьи, выпущенная 27 сентября 2016 г.) .Пути установки и сбор данных При установке WeChat помещает пути к приложениям «/ data / data / com.tencent.mm /» и «/ sdcard / Tencent / MicroMsg» на устройстве Android. Такие данные, как записи чата, конфигурации, созданные во время работы WeChat, хранятся в трех подкаталогах вышеупомянутой папки «com.tencent.mm», это «базы данных», «shared_prefs» и «MicroMsg». В каталогах базы данных и shared_prefs кэшируются такие данные, как информация об аутентификации пользователя и файлы конфигурации.В каталоге MicroMsg хранятся важные данные о действиях пользователей. При запуске WeChat создает уникальный номер «uin» для каждого пользователя и помещает соответствующую папку с личными данными по пути «/data/data/com.tencent.mm/MicroMsg». Папка с личными данными названа с использованием значения MD5, рассчитанного на основе uin пользователя. Например, имя папки можно вычислить как «833dd516f 909cba7ef 7d16bd9a4673e8 ¼ MD5ð‘mm’ þ uinÞ ». В остальной части этого документа символ 〈udir〉 используется для обозначения имени личной папки пользователя.Путь «/ sdcard / Tencent / MicroMsg» используется для хранения мультимедийных ресурсов, таких как полученные изображения, аудиофайлы и т. Д. У каждого пользователя есть личная папка, названная также путем вычисления MD5 (‘mm’ uin) по пути «/ sdcard / Tencent / MicroMsg ». Наиболее важные источники доказательств в определенной папке пользователя перечислены следующим образом: / data /… / 〈udir〉 /EnMicroMsg.db. Зашифрованная база данных сообщений чата SQLite. / data /… / 〈udir〉 /SnsMicroMsg.db. База данных моментов SQLite. / SDCard /… / 〈udir〉 / image2 /. Необработанные изображения, относящиеся к сообщениям изображения./ SDCard /… / 〈udir〉 / voice2 /. Необработанные аудиофайлы, относящиеся к голосовым сообщениям. / SDCard /… / 〈udir〉 / видео /. Необработанные видео, относящиеся к видеосообщения. / SDCard /… / WeiXin /. Мультимедийные файлы (включая изображения и видео), загруженные из Moments (с помощью команды «Сохранено в телефон»). Поскольку для доступа к каталогу «com.tencent.mm» требуются привилегии root, получение цифровых доказательств со смартфонов Android отличается для корневых и некорневых устройств. В случае корневого устройства данные могут быть извлечены напрямую с помощью команды Android Debug Bridge (adb).В частности, это включает использование команды adb pull для экспорта всего каталога «/data/data/com.tencent.mm». В случае устройства Android без рутирования (то есть устройства, которое не может получить привилегии root), данные WeChat не могут быть получены с помощью команды adb pull. После многочисленных тестов было найдено новое решение (называемое «методом резервного копирования без рутирования») для извлечения пользовательских данных WeChat на устройстве Android. Для устройств с версиями WeChat не выше 6.0 команда «backup», предоставляемая adb, может использоваться для получения сжатого файла резервной копии (с расширением.tar.gz extension), который содержит файлы данных, необходимые для криминалистической экспертизы. Для устройств с версиями WeChat новее 6.0 резервное копирование данных с помощью команды adb backup невозможно. Альтернативным решением является использование команды adb install для деградации WeChat до версии 6.0, а затем использование резервного копирования adb для резервного копирования пользовательских данных. Возникает естественный вопрос: вызывает ли операция понижения версии WeChat до версии 6.0 какую-либо потерю данных? Мы

6

S. Wu et al. / Digital Investigation 21 (2017) 3e10

внимательно сравнил полученный WeChat (версия 6.3.27, выпущен 27 сентября 2016 г.) данные с помощью команды adb pull с корневым доступом к тем, которые были получены с помощью «метода резервного копирования без рутирования». Результаты тестирования показывают, что 9 файлов, таких как systemInfo.cfg, staytime.cfg и т. Д., Были изменены, а 3 файла, включая wakelock_status.bin, com.android.opengl.shaders_cache и psk.key, были удалены. К счастью, самые важные файлы в области цифровой криминалистики, такие как EnMicroMsg.db, SnsMicroMsg.db и т. Д., Остались нетронутыми. Для доступа к каталогу «/ sdcard / Tencent / MicroMsg» не требуются права root, мы можем напрямую извлечь данные из этого каталога с помощью команды adb pull.Расшифровка базы данных сообщений EnMicroMsg.db — это база данных SQLite сообщений чата пользователя, зашифрованная с помощью SQLCipher. Анализируя декомпилированный код приложения WeChat, мы можем определить, что ключ дешифрования рассчитывается на основе международного идентификатора мобильного оборудования (IMEI) смартфона и uin текущего пользователя WeChat следующим образом: dec key ¼ Left7ðMD5ðIMEI þ uinÞÞ, где Метод Left7 извлекает первые семь символов строки. Данные IMEI и uin можно извлечь из полученных файлов конфигурации CompatibilityInfo.cfg и system_conf g_prefs.xml. Чтобы зашифровать базу данных SQLite, SQLCipher разбивает файл базы данных на блоки размером 4 КБ, а затем вычисляет зашифрованные тексты этих файловых блоков, используя алгоритм симметричного шифрования AES. Следовательно, чтобы расшифровать файл базы данных, нам просто нужно вычислить открытый текст каждого блока размером 4 КБ зашифрованного файла с помощью dec_key. UIN пользователя является критическим элементом для вычисления ключа дешифрования. Однако в случае, если несколько учетных записей WeChat вошли в один и тот же смартфон, только uin последнего зарегистрированного пользователя сохраняется в файле system_confg_prefs.xml. Чтобы получить данные WeChat других пользователей, мы должны вычислить uin из имени их личных папок. Имя папки пользователя — имя каталога ¼ MD5ð‘mm þ uinÞ, где uin — это 32-битное значение. Таким образом, мы могли провести исчерпывающий поиск в 32-битном пространстве значений и найти uin. Исчерпывающий расчет всегда занимает много времени (более 48 часов на ПК), мы предварительно вычислили все 232 имени каталога и сохранили их в сбалансированном двоичном дереве. Для этого требуется около 100 ГБ дискового пространства.

Рис.2.Случай чат-сцены.

сообщений имеют разные схемы хранения. Текстовое сообщение сохраняется в поле «содержание». Мультимедийные объекты, такие как изображения, аудио и видео, могут быть извлечены из локальных путей путем анализа закодированных строк в поле «imgPath». Если isSend равен 1, сообщение отправлено пользователем. В противном случае это сообщение создается «говорящим». Совершенно очевидно, что полное восстановление сцены чата дает цифровым следователям лучшее понимание смысла общения.Здесь мы подробно объясняем процессы извлечения мультимедийных ресурсов, встроенных в диалог, следующим образом. Для изображения. Закодированная строка имеет вид «THUMB_DIRPATH: // th_dbb5e4622e87f85226c8da6893698fc0». Пусть S1 представляет строку заголовка «THUMB_DIRPATH: // th_». Путь к этому изображению вычисляется следующим образом:

Записи общения Как показано на рис. 2, содержимое чата WeChat часто содержит мультимедийную информацию, а сообщения изображений, смайликов или голосов во время сеанса чата часто передают конкретные значения, такие как текстовые сообщения.Все записи разговоров пользователя хранятся в таблице данных «message» базы данных EnMicroMsg.db. На рис. 3 показан фрагмент таблицы «message», который соответствует пути к файлу

〈〈uDir〉 þ «= image2 =» þ substr1S1; 2; 3Þ þ «=» þ substrðS1; 6; 7Þ þ «= th» þ S1; где uDir ¼ «/ sdcard / Tencent / MicroMsg / 〈udir〉», substr (S, start, end) возвращает строку символов, начинающуюся с номера начального индекса и доходящую до конечного индекса. В этом примере

путь к файлу ¼ 〈uDir〉 = image2 = b5 = 62 = th dbb5e4622e87f85226c8da6893698fc0:

диалог на рис.2. Поля данных каждой записи сообщения, представляющие интерес для криминалистики, включают «говорящий», «время создания», «тип», «контент», «imgPath» и «isSend». Поле «говорящего» хранит учетную запись WeChat, с которой общается пользователь, его подробная информация хранится в таблицах данных «userinfo» и «rcontact». «Время создания» — это отметка времени этого сообщения. Поле «тип» соответствует различным формам содержимого сообщения, включая текст, изображения, видео и аудио. Разные виды

Для аудио.Сначала мы вычисляем MD5-хэш строки кодирования, хранящейся в поле «imgPath». Например, пусть строка кодировки S ¼ 171511050616bf5274d86bf101. Путь голосового сообщения вычисляется как

путь к файлу ¼ 〈uDir〉 þ «= voice2 =» þ substrðS1; 0; 1Þ þ «=» þ substrðS1; 3; 4Þ þ «= сообщение» þ S þ «: amr»;

S. Wu et al. / Digital Investigation 21 (2017) 3e10

7

Рис. 3. Таблица данных истории чата WeChat.

, где S1 ¼ MD5 (S) ¼ eb6c4a4f1efa47f2

dbd37004654.В этом случае голос будет «〈uDir〉 / voice2 / eb / 6c / msg_1715110 50616bf5274d86bf101.amr». Для видео. Режим хранения видео относительно прост. Пусть S будет строкой кодирования, путь к видео —

путь к файлу ¼ 〈uDir〉 = «= video =» þ S þ «: mp4»: после определения конкретных путей хранения мультимедийных файлов сцена чата может быть восстановлен успешно. На рис. 4 представлен результат расследования связи с говорящим «wxid_i17s4u02q3ka12» (описанным на рис. 3) с использованием разработанного нами инструмента судебной экспертизы.Моменты Моменты — это сообщество, в котором пользователи делятся своей жизнью с друзьями. Раздача записей Моментов также содержит мультимедиа

Рис. 4. Криминалистический результат нашего подхода.

сообщений, как показано на рис. 1 (b). Сообщения моментов хранятся в базе данных SnsMicroMsg.db без шифрования. Основные таблицы данных, ориентированные на криминалистику, включают «SnsInfo» и «SnsComment». В таблице SnsInfo хранятся сообщения Moments, включая тексты и ссылки на мультимедийные файлы (изображения или видео).В таблице SnsComment хранятся связанные комментарии к сообщению о совместном использовании. На рис. 6 показан пример сообщений Moments, хранящихся в таблице «SnsInfo», которая открывается непосредственно в программе просмотра SQLite. Соответствующий фрагмент моментов показан на рис. 5. Основные поля данных включают «userName», «createTime» и «content». Поле «userName» указывает владельца сообщения совместного использования, а «контент» — это данные совместного использования сообщения, хранящиеся в виде большого двоичного объекта (BLOB), как показано на рисунке 6. Данные поля «контент» состоят из несколько сегментов данных со структурой тип-длина-данные (TLD).В структуре данных TLD, см. Рис. 7 (a), первый байт определяет тип содержимого данных, второй байт указывает длину данных, а третья часть хранит само содержимое данных. Подробный формат поля содержимого WeChat Moments можно отобразить после анализа объекта данных BLOB. Как показано на рис. 7 (b), ключевыми элементами поля содержимого являются «msgOwner», «msgContent», «msgResID», «msgImagePath» и «msgImagePath3», большинство из которых хранятся в структуре TLD. MsgContent — это текст сообщения Moments, msgOwner — это пользователь, отправивший сообщение.msgResID — идентификатор мультимедийного ресурса длиной 20 байтов. URL-путь загруженного мультимедийного файла сохраняется в поле msgImagePath (рис. 8), msgImagePath3 содержит URL-адрес эскиза загруженного мультимедийного файла. Эффективный подход к «чтению» данных контента — это создание настраиваемого шаблона анализа данных (с помощью Text /

Рис. 5. Пример Moments.

8

S. Wu et al. / Digital Investigation 21 ( 2017) 3e10

Рис. 6. Хранение моментов.

Рис. 7. Данные, хранящиеся в сообщении Moments.

Рис. 8. Значение «msgImagePath» содержимого.

S. Wu et al. / Digital Investigation 21 (2017) 3e10

9

на рабочей станции с процессором Intel Core i7 2,4 ГГц и 16 ГБ ОЗУ. Результаты экспериментов Рис. 9. Структура блока в кеш-файле sns.block. 〈Num〉.

Hex Editor «010 Editor» 10) после определения структуры хранения этого файла, как показано на рис. 8. Мультимедийные ресурсы могут быть получены с сервера WeChat после извлечения URL-адреса мультимедийного файла из поля msgImagePath.Миниатюры вышеупомянутых мультимедийных ресурсов также могут быть извлечены из кэшированных файлов на устройстве. Изучение моментов всегда генерирует файлы кэша, которые хранятся по пути «〈uDir〉 /sfs/sns.block. 〈Num〉». Символ 〈num〉 представляет собой строку чисел. Кэш-файл с максимальным номером — это полные журналы исследования моментов. Sns.block. 〈Num〉 содержит несколько блоков, каждый блок имеет структуру, показанную на рис. 9. SNSID — это идентификационная строка в формате «Wd / f / snsu_ 〈msgResID〉» или «Wd / f / snsblur_src_ 〈MsgResID〉 ».SNSContent — это необработанные двоичные данные эскиза. Следовательно, мы можем точно найти эскиз мультимедиа в сообщении Moments, используя msgResID (см. Рис. 7 (b)). Преобразование формата аудиофайлов Аудиофайлы WeChat с расширением «.aud» используют индивидуальный формат, немного измененный по сравнению со стандартными форматами AMR или SILK_v3. Ранние версии WeChat использовали AMR для кодирования и хранения аудиофайлов с удалением только информации подписи файла AMR. Следовательно, эти аудиофайлы могут быть декодированы и воспроизведены с помощью обычного декодера, такого как пакет FFmpeg, путем добавления «#! AMR» в качестве заголовка файла.В более новых версиях WeChat кодирование звука основано на SILK_v3. Это бесплатный (RF) формат широкополосного кодирования звука SILK, предоставляемый Skype. Чтобы декодировать и воспроизводить голосовое сообщение с помощью обычных мультимедийных проигрывателей во время судебной экспертизы, необходимо преобразовать формат кодирования аудиофайлов. Аудиофайл SILK_v3 может быть преобразован в аудиофайл PCM с использованием голосового кодера Opus11 с частотой дискретизации, установленной на 48 кГц. Поскольку звук PCM аналогичен звуку WAV, звуковой файл PCM может быть декодирован и воспроизведен обычными аудиопроигрывателями путем добавления заголовка файла WAV.Эксперименты и оценка Экспериментальная установка В нашем эксперименте наборы тестовых данных, полученные в результате искусственного производства, использовались для оценки применимости нашего метода. Были протестированы основные функции судебной экспертизы, включая сбор данных, расшифровку и расследование коммуникаций. Сбор данных в основном зависит от конкретного устройства Android и версии WeChat, тогда как расшифровка и расследование связи зависят только от версий WeChat. Версии WeChat от 5.0 до 6.3 были установлены на шести основных Android-смартфонах разных производителей, и для проверки коммуникационного расследования, включая восстановление текстового сообщения, графического сообщения, голосового сообщения и видеосообщения, использовались искусственные данные.Проведены судебно-медицинские эксперименты.

Как показано в таблице 1, наш подход к сбору данных был протестирован на шести устройствах, и данные различных WeChat v5.0 e v6.3.27 были успешно получены. «Xiaomi 4C» и «Samsung Galaxy S6» не рутированы, данные WeChat v6.1 и более поздних версий были извлечены с помощью «некорневого метода резервного копирования». Результаты тестирования функций судебной экспертизы, включая расшифровку базы данных сообщений, анализ коммуникационных записей и исследование моментов, показаны в таблице 2, что указывает на то, что наш метод, обсуждаемый в этой статье, применим для исследования Android WeChat начиная с версии v5.0 до v6.3.27. Хотя использование WeChat на эмуляторе встречается редко, мы также протестировали судебную экспертизу WeChat (v6.0.0.54 и v6.3.27) на двух эмуляторах, Genymotion12 и BlueStacks.13 Эмулятор Android можно рассматривать как устройство Android с правами root, результаты тестов на эмуляторах Android не отличаются от результатов на смартфонах. Возникает естественный вопрос: вызывает ли операция понижения версии WeChat до версии 6.0 какую-либо потерю данных? Мы внимательно сравнили полученный WeChat (версия 6.3.27) файлы данных с помощью команды adb pull с привилегиями root по сравнению с теми, которые были получены с помощью «метода резервного копирования без рута». Этот тест проводился на смартфоне Xiaomi 4C. Мы вычислили значение MD5 для каждого извлеченного файла и выяснили несоответствия между двумя наборами файлов. Результаты тестирования показаны в таблице 3. 9 файлов были изменены и 3 файла удалены. К счастью, большинство извлеченных файлов, включая важные файлы EnMicroMsg.db, SnsMicroMsg.db и т. Д., Остались нетронутыми. Еще одно беспокойство вызывает то, что WeChat v6.0 не будет поддерживаться в определенных версиях системы Android в будущем. В нашем тесте на Xiaomi 4C, который обновлен до Android 6.0 с использованием встроенного программного обеспечения CyanogenMod14, «метод резервного копирования без рутирования» по-прежнему работал хорошо. Однако в будущем потребуются дополнительные тесты на Android v6.0 и v7.0, а также необходимо улучшить «метод резервного копирования без рутирования», чтобы он соответствовал грядущим изменениям в WeChat и системе Android. Выводы В этой статье мы исследовали несколько общих вопросов, которые возникают при судебно-медицинской экспертизе Android WeChat, включая: 1) сбор пользовательских данных и декодирование базы данных зашифрованных сообщений; 2) расследование общения и 3) то, чем пользователь делился с Моментами.Мы также предлагаем соответствующие технические методы, отвечающие вышеуказанным вопросам. Насколько нам известно, мало литературы, в которой детально анализируется криминалистический анализ WeChat, как в нашей. Это исследование может предоставить важные справочные материалы для исследователей и исследователей цифровой криминалистики. WeChat обновляется время от времени, как правило, раз в месяц. Обновление обычно означает возможные изменения в структуре хранения данных и мерах защиты данных. Такие проблемы также встречаются при экспертизе других приложений Android.Поэтому обратный анализ приложений Android и механизмы защиты данных должны постоянно изучаться, чтобы соответствовать новым требованиям цифровых исследований. Наши будущие работы также включают более тщательное тестирование «метода резервного копирования без рутирования» с использованием Android v6.0 или новее и редактора http://www.sweetscape.com/010 http://www.sweetscape.com/010

12 10 11

. http://www.opus-codec.org.

13 14

https://www.genymotion.com. http://www.bluestacks.cn. http: //www.cyanogenmod.орг.

10

S. Wu et al. / Digital Investigation 21 (2017) 3e10

Таблица 1 Результаты тестирования сбора данных. Смартфон

Версия

Xiaomi 4C Samsung Galaxy Note4 LG G4 HTC One Moto X Samsung Galaxy S6 Edge

5.0

5.2.1

5.4.0.51

6.0.0.54

6.1.0.66

6.2.0

6.3.27

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

Таблица 2 Результаты тестирования функций дешифрования и криминалистики.Функция

Версия

Расшифровка Текстовое сообщение Графическое сообщение Голосовое сообщение Видео сообщение Моменты

5.0

5.2.1

5.4.0.51

6.0.0.54

6.1.0.66

6.2.0

6.3.27

✓ ✓ ✓ ✓ ✓

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓

Таблица 3 Несоответствия после деградации WeChat v6.3.27 до v6.0 Измененные файлы: getdns.ini, push_proc_startup.xml, com.tencent.mm_preferences.xml, dcfff5a88f266e972a7fd1cf80a760ec_26031732.getdns2, MM.mmap2, crash_status_ file_fake.xml, system.crash_status_fc_file.xml .opengl.shaders_cache, psk.key Появились config.dat, md5, manifest и input.monitor

появляются новые версии WeChat для определения потенциальной нестабильности данных во время перехода на более раннюю версию. Метод резервного копирования без рутирования также необходимо улучшить, чтобы он соответствовал грядущим изменениям в WeChat и системе Android.Благодарности Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (№ 61402117) и Специальной программой по информационной безопасности Комиссии национального развития и реформ (№ FA GAI BAN GAO JI [2015] 289). Ссылки Allix, K., Jerome, Q., Bissyand, T.F., Klein, J., State, R., Traon, Y.L., 2014. Криминалистический анализ вредоносных программ для Android: как пишется вредоносное ПО и как его можно обнаружить? В: Конференция по компьютерному программному обеспечению и приложениям (COMPSAC), IEEE 38th Annual 2014, стр.384e393. http://dx.doi.org/10.1109/ COMPSAC.2014.61. Англано, К., 2014. Криминалистический анализ мессенджера WhatsApp на смартфонах Android. Цифра. Расследование. 11 (3), 201e213. http://dx.doi.org/10.1016/

j.diin.2014.04.003 специальный выпуск: Встроенная криминалистика. http: // www. sciencedirect.com/science/article/pii/S1742287614000437. Чанг, Х., Парк, Дж., Ли, С., Кан, К., 2012. Цифровая криминалистическая экспертиза служб облачного хранения. Цифра. Расследование. 9 (2), 81e95. http://dx.doi.org/10.1016/ j.diin.2012.05.015. http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/ S1742287612000400. Фэрбенкс, К.Д., 2012. Анализ ext4 для цифровой криминалистики. Цифра. Расследование. 9 (Дополнение), S118eS130. http://dx.doi.org/10.1016/j.diin.2012.05.010 Материалы двенадцатой ежегодной конференции {DFRWS} 12-й ежегодной конференции по исследованиям в области цифровой криминалистики. http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/ S1742287612000357. Хуг, А., 2011. Криминалистическая экспертиза Android: расследование, анализ и мобильная безопасность для Google Android.Syngress Publishing. Карписек, Ф., Баггили, И., Брайтингер, Ф., 2015. Криминалистическая экспертиза сети WhatsApp: расшифровка и понимание сообщений о вызовах Whatsapp. Цифра. Расследование. 15, 110e118. http://dx.doi.org/10.1016/j.diin.2015.09.002 специальный выпуск: Большие данные и интеллектуальный анализ данных. http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/ S1742287615000985. Ли, Дж., Гу, Д., Луо, Ю., 2012. Криминалистика вредоносных программ для Android: реконструкция вредоносных событий. В: 2012 32-я Международная конференция по распределенным вычислительным системам, семинары, стр.552e558. http://dx.doi.org/10.1109/ICDCSW.2012.33. Мартини, Б., До, К., Чу, К.-К.Р., 2015. Криминалистическая экспертиза мобильного облака: анализ семи популярных приложений для Android. Препринт arXiv arXiv: 1506.05533. Мутава, Н.А., Баггили, И., Маррингтон, А., 2012. Судебно-медицинский анализ приложений социальных сетей на мобильных устройствах. Цифра. Расследование. 9 (Дополнение), S24eS33. http: // dx.doi.org/10.1016/j.diin.2012.05.007 Материалы двенадцатой ежегодной конференции {DFRWS} 12-й ежегодной конференции по исследованиям в области цифровой криминалистики.http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1742287612000321. Силла, К., 2015. Судебные артефакты Wechat: извлечение и анализ телефонов Android (магистерская работа). Университет Пердью. Sim ~ ao, A. M. d. Л., Сиколи, Ф. К., Мело, Л. П. д., Деус, Ф. Э. Г. д., Соуза Джуниор, Р. Т. Д., 2011. Сбор и анализ цифровых доказательств в смартфонах Android. Int. J. Forensic Comput. Sci. 1, 28С43. Сильв, Дж., Кейс, А., Марциале, Л., Ричард, Г.Г., 2012. Получение и анализ энергозависимой памяти с устройств Android.Цифра. Расследование. 8 (3), 175e184. http://dx.doi.org/ 10.1016 / j.diin.2011.10.003. http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/ S1742287611000879. Видас, Т., Чжан, К., Кристин, Н., 2011. К общей методологии сбора данных для устройств Android. Цифра. Расследование. 8 (Дополнение), S14eS24. http://dx.doi.org/10.1016/ j.diin.2011.05.003 Материалы одиннадцатой ежегодной конференции {DFRWS} 11-й ежегодной конференции по исследованиям в области цифровой криминалистики. http: //www.sciencedirect. com / science / article / pii / S1742287611000272.Ву, Б., Сюй, М., Чжан, Х., Сюй, Дж., Рен, Ю., Чжэн, Н., 2013. Подход к восстановлению для регистраторов истории SQLite из YAFFS2. В: Информационные и коммуникационные технологии: Международная конференция, ICT-EurAsia 2013, Джокьякарта, Индонезия, 25–29 марта 2013 г. Материалы. Springer, Berlin Heidelberg, стр. 295e299. http://dx.doi.org/10.1007/978-3-642-36818-9_30. Гл. Xu, M., Yang, X., Wu, B., Yao, J., Zhang, H., Xu, J., Zheng, N., 2013. Метод на основе метаданных для восстановления файлов и файловых следов из { ЯФФС2}.Цифра. Расследование. 10 (1), 62e72. http://dx.doi.org/10.1016/j.diin.2013.02.006. http: //www.sciencedirect. com / science / article / pii / S1742287613000145. Чжоу, Ф., Ян, Ю., Дин, З., Сан, Г., 2015. Дамп и анализ энергозависимой памяти Android в Wechat. В: Международная конференция IEEE по коммуникациям (ICC), 2015 г., стр. 7151e7156. http://dx.doi.org/10.1109/ICC.2015.7249467.

О взаимосвязи между атипичной работой (-ями) и психическим здоровьем: новые идеи из опыта Италии

  • Artazcoz, L., Боррелл, К., Кортес, И., Эскрипта-Агуир, В., и Каскант, Л. (2007). Профессиональная эпидемиология и неравенство в отношении здоровья, связанное с работой: гендерная перспектива для двух взаимодополняющих подходов к исследованиям в сфере труда и здоровья. Журнал эпидемиологии и общественного здравоохранения, 61 , 39–45.

    Google Scholar

  • Бардаси, Э. и Франческони, М. (2004). Влияние нетипичной занятости на индивидуальное благополучие: данные группы британских рабочих. Социальные науки и медицина, 58 , 1671–1688.

    Артикул Google Scholar

  • Бенах Дж. И Мунтанер К. (2007). Неустойчивая занятость и здоровье: разработка программы исследований. Новые виды организации труда могут быть столь же опасны для здоровья рабочих, как и традиционная безработица. Журнал эпидемиологии и общественного здравоохранения, 61 , 276–277.

    Артикул Google Scholar

  • Бенах, Дж., Вивес, А., Амабл, М., Ванроелен, К., Тарафа, Г., и Мунтанер, К. (2014). Неустойчивая занятость: понимание новой социальной детерминанты здоровья. Ежегодный обзор общественного здравоохранения, 35 , 229–253.

    Артикул Google Scholar

  • Боле П., Куинлан М., & Мэйхью, С. (2001). Влияние незащищенности работы на здоровье и безопасность: оценка доказательств. Обзор экономических и трудовых отношений, 12 , 32–60.

    Артикул Google Scholar

  • Болле, П. (1997). Подработка: решение или ловушка? International Labour Review, 136 , 557–579.

    Google Scholar

  • Кэрролл, Н.(2005). Безработица и психологическое благополучие . Центр исследований экономической политики, документы для обсуждения, 92.

  • Cottini, E., & Lucifora, C. (2010). Психическое здоровье и условия труда в странах Европы . Документы для обсуждения IZA, 4717.

  • Кутули Г. (2011). Meglio un lavoro a tempo che nessun lavoro? В M. La Rosa (Ed.), La ricerca sociologica e i temi del lavoro. Giovani ricercatori italiani против .Франко Анджели: Studi e Ricerche.

    Google Scholar

  • Де Кайпер, Н., Де Йонг, Дж., Де Витте, Х., Исакссон, К., Риготти, Т., и Шалк, Р. (2008). Обзор литературы по теории и исследованиям психологического воздействия временной занятости: к концептуальной модели. Международный журнал обзоров менеджмента, 10 , 25–51.

    Артикул Google Scholar

  • Де Грип, А., Hoevenberg, J., & Willems, E. (1997). Нетипичная занятость в Европейском Союзе. International Labour Review, 136 , 49–71.

    Google Scholar

  • Делсен, Л. (1991). Атипичные трудовые отношения и государственная политика в Европе. Труда, 5 , 123–149.

    Артикул Google Scholar

  • Дули, Д., Prause, J., & Ham-Rowbottom, K.A. (2000). Неполная занятость и депрессия: лонгитюдные отношения. Журнал здоровья и социального поведения, 41 , 421–436.

    Артикул Google Scholar

  • Эгиди, В., и Спиццичино, Д. (2006). Воспринимаемое здоровье и смертность: многомерный анализ итальянских данных ECHP. род, LXII (3–4), 135–154.

    Google Scholar

  • Еврофонд. (2010). Очень нетипичная работа. Исследовательский анализ четвертого Европейского исследования условий труда . Европейский фонд улучшения условий жизни и труда, Бюро публикаций Европейского Союза, Люксембург.

  • Еврофонд. (2013). Женщины, мужчины и условия труда в Европе . Люксембург: Бюро публикаций Европейского Союза.

    Google Scholar

  • Евростат. (2002). На марше на рынке труда? Женщины и мужчины на временной работе в Европе . Статистика в фокусе, Тема 3, 13/2002.

  • Ферри, Дж. Э., Вестерлунд, Х., Виртанен, М., Вахтера, Дж., И Кивимяки, М. (2008). Гибкие рынки труда и здоровье сотрудников. Скандинавский журнал труда, окружающей среды и здоровья, 6 , 98–110.

    Google Scholar

  • Гаш В., Мертенс А. и Ромеу Гордо Л. (2007). Срочная работа вредит вашему здоровью? Сравнение Западной Германии и Испании. Европейских обществ, 9 , 429–458.

    Артикул Google Scholar

  • Годин И. и Киттель Ф. (2004). Дифференциальная экономическая стабильность и психосоциальный стресс на работе: ассоциации с психосоматическими жалобами и прогулами. Социальные науки и медицина, 58 , 1543–1553.

    Артикул Google Scholar

  • Голдсмит, А. Х., Веум, Дж. Р., и Дарити, В. (1997). Безработица, безработица, психологическое благополучие и самооценка: теория и доказательства. Социально-экономический журнал, 26 , 133–158.

    Артикул Google Scholar

  • Истат.(2014a). Condizioni di salute, fattori di rischio e ricorso ai servizi sanitari — Anno 2013. Nota Metodologica, www.istat.it, Roma.

  • Истат. (2014b). Годовой отчет 2014 — La situazione del Paese . Рома: Истат.

    Google Scholar

  • Джахода, М. (1982). Работа и безработица . Кембридж, Массачусетс: Издательство Кембриджского университета.

    Google Scholar

  • Каллеберг, А.Л. (2000). Нестандартные трудовые отношения: Подработка, временная работа и работа по контракту. Ежегодный обзор социологии, 26 , 341–365.

    Артикул Google Scholar

  • Kim, I.-H., Muntaner, C., Khang, Y.-H., Paek, D., & Cho, S.-I. (2006). Взаимосвязь между нестандартной работой и психическим здоровьем в репрезентативной выборке населения Южной Кореи. Социальные науки и медицина, 63 , 566–574.

    Артикул Google Scholar

  • Ким, И.-Х., Мунтанер, К., Вахид Шахиди, Ф., Вивес, А., Ванроелен, К., и Бенах, Дж. (2012). Государства всеобщего благосостояния, гибкая занятость и здоровье: критический обзор. Политика здравоохранения, 104 , 99–127.

    Артикул Google Scholar

  • Кляйн Хесселинк, Д. Дж., И ван Вуурен, Т.(1999). Гибкость работы и незащищенность работы: пример Нидерландов. Европейский журнал трудовой и организационной психологии, 8 , 273–293.

    Артикул Google Scholar

  • Ла Валле, И., Артур, С., Миллуорд, К., Скотт, Дж., И Клейден, М. (2002). Счастливые семьи? Атипичная работа и ее влияние на семейную жизнь . Бристоль: Policy Press.

    Google Scholar

  • Ласфарг, Г., Дониол-Шоу, Г., Дериенник, Ф., Бардо, Ф., Юэз, Д., и Рондо дю Нойер, К. (1999). Précaritié de l’emploi et santé: различия между мужчинами и женщинами. Archives des Maladies Professionnelles et de Médecine du Travail, 8 , 273–293.

    Google Scholar

  • Левчук, В., де Вольф, А., Кинг, А., и Поланьи, М. (2003). От нагрузки на работе до нагрузки: последствия нестандартной занятости для здоровья. Just Labor, 3 (осень), 23–35.

    Google Scholar

  • Mackenbach, J. P., Stirbu, I., Roskam, A. R., Schaap, M. M., Menvielle, G., Leinsalu, M., et al. (2008). Социально-экономические неравенства в отношении здоровья в 22 странах Европы. Медицинский журнал Новой Англии, 358 , 2468–2481.

    Артикул Google Scholar

  • МакХорни, К.А., Уэр, Дж. Э., и Ракзек, А. Э. (1993). Краткое описание состояния здоровья MOS из 36 пунктов (SF-36): II. Психометрические и клинические тесты валидности при измерении конструктов физического и психического здоровья. Медицинское обслуживание, 31 , 247–263.

    Артикул Google Scholar

  • Мерфи Г. К. и Атанасу Дж. А. (1999). Влияние безработицы на психическое здоровье. Журнал профессиональной и организационной психологии, 72 , 83–99.

    Артикул Google Scholar

  • Перлин, Л. (1989). Социологическое исследование стресса. Журнал здоровья и социального поведения, 30 , 241–256.

    Артикул Google Scholar

  • Пирани, Э. и Сальвини, С. (2012). Неравенство места проживания и здоровья: исследование для пожилых итальянцев. Статистические методы и приложения, 21 , 211–226.

    Артикул Google Scholar

  • Пирани, Э. и Сальвини, С. (2015). Вредно ли временное трудоустройство для здоровья? Продольное исследование итальянских рабочих. Социальные науки и медицина, 124 , 121–131.

    Артикул Google Scholar

  • Quesnel-Vallée, A., DeHaney, S., & Ciampi, A. (2010). Временная работа и депрессивные симптомы: анализ предрасположенности. Социальные науки и медицина, 70 , 1982–1987 гг.

    Артикул Google Scholar

  • Quinlan, M., Mayhew, C., & Bohle, P. (2001). Глобальное распространение нестандартной занятости, дезорганизация труда и последствия для профессионального здоровья: обзор недавних исследований. Международный журнал служб здравоохранения, 31 , 335–414.

    Артикул Google Scholar

  • Робоун С., Джонс А. и Райс Н. (2011). Договорные условия, условия труда и их влияние на здоровье и благополучие. Европейский журнал экономики здравоохранения, 12 , 429–444.

    Артикул Google Scholar

  • Родригес, Э. (2002). Маржинальная занятость и здоровье в Великобритании и Германии: предсказывает ли нестабильная занятость здоровье? Социальные науки и медицина, 55 , 963–979.

    Артикул Google Scholar

  • Сантин, Г., Кохидон, К., Голдберг, М., & Имбернон, Э. (2009). Симптомы депрессии и нетипичные рабочие места во Франции по данным Десятилетнего исследования состояния здоровья за 2003 год. Американский журнал промышленной медицины, 52 , 799–810.

    Артикул Google Scholar

  • Силла, И., Грасиа, Ф. Дж., И Пейро, Дж. М. (2005). Отсутствие гарантий занятости и последствия для здоровья различных типов временных работников. Экономическая и промышленная демократия, 26 , 89–117.

    Артикул Google Scholar

  • Сверке, М., Галлахер, Д. Г., и Хеллгрен, Дж. (2000). Альтернативные условия работы: стресс на работе, благополучие и проорганизационное отношение сотрудников с разными трудовыми договорами.В К. Исакссон, К. Хогстедт, К. Эрикссон и Т. Теорелл (ред.), Влияние нового рынка труда на здоровье (стр. 145–167). Нью-Йорк: Пленум.

    Google Scholar

  • Theodossiou, I. (1998). Влияние низкой оплаты труда и безработицы на психологическое благополучие: подход логистической регрессии. Журнал экономики здравоохранения, 17 , 85–104.

    Артикул Google Scholar

  • Томпсон, В.(2009). Италия: Реформы Treu (1997) и Biagi (2003). В Политическая экономия из уроков реформ, извлеченных из пенсий, товарных рынков и рынков труда в десяти странах ОЭСР . OECD General Economics & Future Studies, 7.

  • Treu, T. (1992). Гибкость труда в Европе. International Labour Review, 131 , 497–512.

    Google Scholar

  • Виньоли, Д., Пирани, Э., & Сальвини, С. (2014). Семейные расстановки и удовлетворенность жизнью в Европе. Исследование социальных показателей, 117 , 967–986.

    Артикул Google Scholar

  • Виртанен, М., Кивимяки, М., Йоэнсуу, М., Виртанен, П., Эловайнио, М., и Вахтера, Дж. (2005). Временная занятость и здоровье: обзор. Международный журнал эпидемиологии, 34 , 610–622.

    Артикул Google Scholar

  • Виртанен, П., Люкконен, Л., Вахтера, Дж., Кивимяки, М., и Коскенвуо, М. (2003). Неравенство в отношении здоровья среди рабочей силы: структура «ядро – периферия» рынка труда. Международный журнал эпидемиологии, 32 , 948–953.

    Артикул Google Scholar

  • Вивес, А., Амабл, М., Феррер, М., Монкада, С., Льоренс, К., Мунтанер, К., и др. (2013). Нестабильность занятости и плохое психическое здоровье: данные Испании о новой социальной детерминанте здоровья. Журнал по окружающей среде и общественному здравоохранению, 2013 , 1–10. DOI: 10.1155 / 2013/978656.

    Артикул Google Scholar

  • Уэр, Дж.