Как пользоваться Wi-Fi Direct на телевизоре LG — журнал LG MAGAZINE Россия
Wi-Fi Direct – это технология, при помощи которой два (или больше) устройства, имеющие доступ к беспроводной сети, могут быть объединены в пару и передавать друг другу информацию без участия дополнительных приспособлений, таких как, например, хот-споты или маршрутизаторы. В отличие от обычной Wi-Fi сети, для которой характерно наличие беспроводной точки доступа, к которой впоследствии подключаются все остальные устройства, при Wi-Fi direct подключении функции точки доступа (коммутацию и маршрутизацию) выполняет одно из подключенных устройств.
Плюсы Wi-Fi Direct
- Режим Wi-Fi Direct удобен. Подключить его очень легко, к тому же в подавляющем большинстве случаев для этого не требуется дополнительное оборудование. Все современные модели телевизоров LG оснащены этой функцией. Если ваша модель телевизора выпущена до 2012 года, может понадобиться дополнительно приобрести универсальный адаптер.
- Скорость передачи данных через Wi-Fi Direct не уступает по скорости обычной сети Wi-Fi, так как по большому счету чипы direct практически идентичны тем, что используются в модулях Wi-Fi, информация так же передается на частоте 2,4 ГГц на расстояние не дальше, чем 200 метров при условии прямой видимости.
- Так как технология в подавляющем большинстве случаев используется в сравнительно небольших помещениях, то максимальная скорость позволяет передавать не только файлы небольшого размера (например, изображения), но и большие по объему занимаемой памяти и тяжелые аудио- и видеофайлы.
- Технология Wi-Fi Direct совместима абсолютно со всеми современными операционными системами: Android, MacOS и Windows 10, так что вы сможете подключить к своему телевизору LG смартфон любого производителя.
- Алгоритмы Wi-Fi Direct автоматически определяют самое мощное устройство в паре (или в нескольких) и присваивают ему значение Master, в то время, как менее мощные гаджеты автоматически становятся Slave.
- Использование методов шифрования на базе WPA2, что позволяет надежно защитить передаваемую информацию.
Именно поэтому Wi-Fi Direct так хорошо подходит для повседневного использования: с ее помощью можно подключать смартфон или планшет к телевизору, чтобы смотреть изображения на большом экране, а также прослушивать музыку и смотреть видео.
Как подключить Wi-Fi Direct к телевизору LG?
- Активируйте опцию Wi-Fi Direct в Настройках вашего смартфона / планшета. Она находится в разделе «Беспроводные подключения».
- При помощи пульта дистанционного управления войдите в «Настройки» телевизора LG и найдите раздел «Сеть».
- Включите функцию Wi-Fi Direct.
- При первом подключении телевизор может предложить заполнить поле «Имя устройства» (Device Name). Либо это можно сделать в разделе меню «Настройки Direct Wi-Fi» (Wi-Fi Direct Settings).
- Нажмите кнопку «Опции» на пульте дистанционного управления, затем вам нужен будет раздел «Вручную» (Manual), а в нем пункт «Другие методы» (Other Methods).
- Дождитесь, пока в списке доступных устройств не появится имя вашего телефона или планшета.
- Выберите этот пункт меню и подтвердите подключение кнопкой OK на пульте дистанционного управления.
- Подтвердить подключение на смартфоне, введя ключ шифрования, полученный на телевизоре ранее. Для этого нужно просто следовать инструкциям на экране телефона.
После подключения вы сможете смотреть фото из «Галереи» смартфона, а также получите доступ к музыке и видео.
Также пользоваться Wi-Fi Direct на телевизоре LG можно, скачав на смартфон одно из специально созданных для этого приложений. Они делают управление еще проще и интуитивно понятнее.
Самые популярные приложения для подключения wi—fi direct к телевизору LG
- Web Video Cast (Бесплатно. скачать на Google Play ссылка) Приложение, при помощи которого можно смотреть на телевизоре видео с веб-сайтов, включая фильмы, сериалы, спортивные передачи, концерты, трансляции новостей и прочее, а также просматривать видео, хранящиеся на смартфоне.
- Сast To TV (Бесплатно. Скачать на Google Play ссылка)
Главный плюс приложения – очень простой интерфейс. С его помощью можно транслировать видео со смартфона на телевизор, а также использовать смартфон в качестве пульта ДУ: прибавлять и убавлять звук, перематывать видео и ставить на паузу.
Минусы Wi-Fi Direct
Главным (и практически единственным) методом этого способа синхронизации устройств является то, что при передаче данных на высокой скорости устройства тратят много энергии, что может привести к быстрой разрядке батареи вашего смартфона или планшета
«Яндекс.Директ» запустил инструмент размещения рекламы для малого и среднего бизнеса
Интернет Интернет-реклама, Текст: Владимир Бахур
«Яндекс.Директ» запустил инструмент для быстрой и удобной настройки рекламы — «Мастер кампаний». Он предназначен прежде всего для представителей малого и среднего бизнеса. С его помощью они смогут быстро запустить рекламную кампанию.
«Мастер кампаний» будет полезен тем, кто решает стандартные задачи привлечения клиентов и не готов погружаться в тонкости рекламных настроек. Рекламодателю достаточно указать ссылку на рекламируемую страницу, а дальше можно следовать за Мастером. Он поможет составить объявление, выбрать аудиторию для таргетирования, а также определить цель рекламной кампании и подходящую стратегию.
Объявление будет показано в поиске, на главной странице Яндекса и в Рекламной сети. Посмотреть результаты рекламной кампании можно будет на её странице в Директе. Там отображаются показы, клики, конверсии и другие важные показатели, такие как расходы на рекламу и достижение поставленной цели — например, привлечение заявок или звонков.
«Реклама в интернете сегодня — продукт массового спроса. В Директе каждый день появляются рекламодатели, не размещавшие раньше интернет-рекламу. Поэтому наряду с решениями для профессионалов мы запускаем простые инструменты, которые дают быстрый результат. Это упрощает вход в Директ тем, кто хочет работать с интернет-рекламой, но не готов разбираться со сложными настройками рекламных кампаний», — говорит Мария Савицкая, руководитель «Яндекс.Директа».
Во время тестирования «Мастер кампаний» был доступен ограниченному кругу рекламодателей. Попробовать новый сервис успели более восьми тысяч представителей малого и среднего бизнеса. Отзывы первых клиентов говорят о том, что они довольны результатом.
Помощь с Яндекс.Директ
Ответы на экзамен по сертификации Яндекс.Директ Используйте Поиск на странице (CTR+F), чтобы найти нужный вам вопрос. Вы выбрали стратегию «Ручное управление ставками» и настроили показы только в сетях. Какие опции управления показами вам доступны? Установка недельного бюджета Выбор площадок для показа Установка дневного бюджета Какие показатели можно оптимизировать с помощью автоматических стратегий Директа? Место [читать далее…] На что влияет качество аккаунта в Директе Показатель качества аккаунта Яндекс.Директ помогает оценить эффективность созданных рекламных кампаний. Показатель пересчитывается раз в сутки и может принимать значение от 0 до 10. Однако величина показателя качества не влияет на стоимость размещения или на позиции объявлений — он служит лишь для помощи рекламодателю в общей оценке эффективности рекламных материалов. [читать далее…] Как зарегистрировать агентский аккаунт Агентский аккаунт — это тип логина, который позволяет управлять рекламными кампаниями сразу нескольких персональных аккаунтов из одного рекламного кабинета. Аккаунты такого типа используют рекламный агентства, предоставляющие услуги проведения рекламных кампаний.Как пополнить Яндекс Директ с бонусом, скидкой?
Как сэкономить бюджет в Яндекс Директе?
Промокоды — единоразово для новых клиентов
Промокоды — это бонусы на пополнение счета от партнерских сервисов. Например, вы открыли расчетный счет в банке. При открытии счета вам выдали промокод на 5.000 руб в Директ. Правила использования промокода: пополняете со своего расчетного счета аккаунт Яндекс Директа на 10.000 руб, вводите промокод и Яндекс начисляет сверху еще 5к. — правда, такой способ можно произвести однократно при регистрации рекламного аккаунта в Яндексе. Промокоды могут выдавать партнерские сервисы и банки (например, при открытии расчетного счета промокоды дают — Альфа Банк, Тинькофф).
Ограничения при использовании промокодов?
- Бонусная система действует только для новых клиентов (соответственно, новых аккаунтов). Только на первую рекламную кампанию. Использовать промокод на старый аккаунт не получится.
- На один аккаунт можно активировать только один бонусный код.
- С помощью промокода можно рекламировать только те сайты, которые не рекламировались в Яндекс Директе предыдущие 365 дней.
Многоразовый способ
Использование сервисов с бонусами. Существуют разные сервисы, которые возвращают от 5% до 10%. Например, вы пополнили Яндекс Директ на 50.000 руб, а дополнительно получаете от 2500 до 5000 руб на свой счет, которые можно потратить как на рекламу, так и вывести на карту. При этом никаких ограничений на бонусы не возлагается. Неважно какую сумму вы положите на счет, все равно получите бонус 5%. Благодаря новому сервису “Витамин” вы можете постоянно получать бонус в размере 5%. Как его получить пошагово расскажем ниже.
Как пополнить счет в Яндекс Директ через систему Vitamin
Создаем аккаунт
1 шаг: Первым делом зарегистрируйтесь на сайте vitamin.tools
2 шаг: Заполните 4 регистрационных поля: имя, номер телефона, электронную почту и промокод, если он у вас есть.
3 шаг: Теперь привяжите новый кабинет через раздел “Реклама”. Выберете аккаунт Яндекс.Директ.
4 шаг: Перед вами откроется окно с регистрационными данными. Лучше создавать новый аккаунт, на него будет начисляться бонус при каждом пополнении. Отметим, что старые аккаунты подключить к бонусной системе технически невозможно.
Вам будет доступна привязка только новых кабинетов, в которых ранее не было рекламы. Но вы можете
перенести уже настроенные рекламные кампании в новый кабинет из прежнего.
Далее заполните три поля регистрации: логин, имя и фамилия. Нужно придумать новый логин, который ранее
не был зарегистрирован в системе Яндекса. Если логин будет свободен, регистрация пройдет успешно. При
регистрации вы также можете получить промокод. Воспользуйтесь им.
5 шаг: После регистрации вверху страницы вы заметите поле с уведомлениями.
Система вам предложит:- создать учетную запись в одной из рекламных систем
- запустить рекламные кампании самостоятельно или найти исполнителя в разделе “Агентства/Специалисты”
- Пополнить баланс в рекламных системах
Чуть ниже вы найдете сами рекламные аккаунты.
Вы можете переименовать рекламный аккаунт, отвязать или удалить. Лимит добавления аккаунтов для каждой рекламной системы — 3 раза.
Как пополнить баланс?
Пополните баланс и распределите деньги между рекламными системами. В разделе “Финансы” вы можете выбрать удобный вам способ оплаты.
В системе существует два вида баланса. Первый — это основной баланс, который можно вывести только на площадку. Второй — бонусная система. Бонусы начисляются при переводе с основного баланса на площадку.
Немного о бонусной системе
Размер вашего бонуса будет зависеть от рекламного бюджета. Мы возвращаем 5% от любой суммы перевода. Зачисление средств на счет рекламных систем поступает моментально. Свой бонус вы можете двумя способами: потратить на рекламу или отправить на банковскую карту.
Нужна помощь в настройке рекламы?
Если вам понадобится помощь в настройке рекламы или не будет времени заниматься этим вопросом самостоятельно, в разделе “Агентства/Специалисты” вы найдете исполнителя из большого списка профессионалов.
Необходимо выбрать нужное агентство или специалиста, открыть карточку с описанием его возможностей и контактной информацией. Свяжитесь с исполнителем удобным для вас способом и обсудите детали сотрудничества. Воспользуйтесь фильтром, чтобы найти исполнителя по выбранными вами критериям:
- агентство или специалист;
- город;
- рекламную систему, с которой предстоит работать;
- рекламный бюджет.
Как анализировать рекламную кампанию
В разделе “Аналитика” вы сможете отслеживать статистику вашей рекламной кампании.
Отчет по статистике можно посмотреть в детализации по дням, неделям и даже месяцам. Выбранный вами анализ можно скачать.
Как настроить Яндекс Директ самостоятельно
Яндекс.Директ представляет собой систему контекстной рекламы, связанную с поисковиком Яндекс. Ею может воспользоваться любой бизнесмен, желающий привлечь потенциальных клиентов или повысить посещаемость сайта.
Отличает Директ от конкурентов ряд особенностей, о которых и пойдет речь далее. Я разберу не только их, но и расскажу о том, как начать работу с данной площадкой и выложить свое первое объявление.
Преимущества использования Яндекс.Директ
Предлагаю сразу начать с преимуществ использования этого инструмента.
-
Отлично работающие алгоритмы, подходящие для тех, кто уже давно не может раскрутить свой товар по разным причинам.
-
Повышенная эффективность благодаря присутствующим в системе настройкам.
-
Направленное таргетирование, то есть можно выбрать город, время показа и другие параметры, описывающие целевую аудиторию.
-
Гарантия публикации объявлений на проверенных сайтах, которые уже прошли строгую модерацию.
-
Отсутствие различной документации и других нюансов, мешающих запустить рекламу в кратчайшие сроки.
-
Простой интерфейс, с которым разберется даже начинающий владелец веб-ресурса.
И это только основные преимущества, определяющие всю суть контекстной рекламы в «Директ».
Создание аккаунта и рекламной кампании
Теперь можно приступить к выполнению основных действий на сайте рекламной площадки. Начать стоит с регистрации профиля и размещении основной информации, необходимой для старта рекламной кампании. Перейдите на официальный сайт и создайте новый аккаунт в Яндексе, если у вас его еще нет. После успешной авторизации на главной странице нажмите кнопку «Запустить рекламу».
Понадобится выбрать вашу страну, указать действующий электронный адрес и номер телефона для привязки кампании. Обязательно отметьте галочками принятие всех правил использования сервиса, после чего нажмите кнопку подтверждения.
Обратите внимание, что на сайте есть раздел «Затрудняетесь с настройкой кампании». Там можно выбрать помощь от специалиста Яндекс или частного сертифицированного лица. Конечно, эта услуга будет стоить денег, но некоторым пользователям лучше применить ее, нежели заниматься настройкой вручную.
В первом окне создания кампании понадобится заполнить основную информацию: дать ссылку на сайт, добавить ключевые цели и счетчики, указать стратегию (бюджет на рекламу и места показа) и ввести ограничения по времени. Как только все поля будут заполнены, переходите к следующему шагу.
Второй этап заключается в настройке аудитории. Вы должны выбрать, из какого города она будет, добавить ключевые фразы по запросам и минус-фразы, выбрать интересы пользователя и ретаргетинг (то есть показывать ли объявление тому лицу, которое посещало один из указанных сайтов). Все это заполняется в соответствии с личными предпочтениями.
Остается только выбрать тип объявления. Это может быть текстово-графическое изображение, просто картинка, видео или мобильная реклама. Следующие параметры уже зависят от выбранного типа. Доступно прикрепление различных ссылок и сообщений, изображений и видео, цен на товар и других деталей, которые могут отображаться в объявлении. Есть дополнения, например, виртуальная визитка или цена товара. Каждое из дополнений добавляет определенное количество процентов к кликабельности.
На этом процесс основной настройки завершен. Пополните кошелек, чтобы активировать кампанию.
Подбор ключевых фраз
Важной составляющей успешной рекламной кампании является подбор правильных ключевых фраз. Они и влияют на параметр показа рекламы, то есть объявление всплывает только в том случае, если пользователь ищет в Яндексе что-либо, совпадающее с указанными ключевыми словами. Для начала необходимо узнать, какие из фраз являются самыми популярными и как их нужно писать, чтобы повысить эффективность показов. Для этого используйте фирменный сервис от данной компании под названием Яндекс Подбор слов (Вордстат).
Введите запрос по ключевым словам и ознакомьтесь со статистикой, узнав, какие из выражений вашей тематики самые популярные. Скопируйте их и задайте при настройке своего объявления, указав их в виде списка в специальном блоке. Учитывайте, что фраз для одной группы объявлений может быть не больше 200.
При работе с ключевыми словами вы точно обратите внимание на блок «минус-фразы». Ими являются те запросы, которые не должны триггериться для вашего объявления. Например, вы продаете исключительно летние шины, поэтому вам подходит ключевая фраза «Купить шины», но в качестве минус-слова нужно задать «-зимние», поскольку вы таким не промышляете и показывать рекламу пользователям, желающим приобрести такой комплект, не нужно.
Аукционы в Яндекс.Директ
Выше представлена пошаговая инструкция для новичка, позволяющая разобраться в том, как настроить свою первую группу объявлений и начать продвижение, однако это не все нюансы, которые нужно освоить. Еще одним важным фактором являются аукционы. Так называется схема отбора объявлений для показа, поскольку не вы один хотите продвигать свой товар или услуги при помощи Яндекс.Директ. В первую очередь всегда показываются самые дорогие объявления, то есть те, за которые автор предложил самую высокую ставку. При этом учитываются прогнозы по кликабельности и показатель качества профиля, о чем написано на странице поддержки.
Типы аукционов меняются, и на данный момент Яндекс использует формат VCG. Это сложная система, заключающаяся в автоматическом подборе цены клика, которая необходима для достижения требуемой эффективности рекламной кампании.
Настройка ретаргетинга
Выше я уже вскользь затронул тему ретаргетинга, рассказывая о базовых настройках группы объявлений. Теперь же пришло время поговорить об этой функции более детально, поскольку иногда ее использование помогает значительно повысить кликабельность и эффективность показа объявлений. Если кратко, ретаргетинг – схема показа объявлений тем пользователям, которые уже посещали связанные с вашим продуктом сайты. Вы самостоятельно определяете, какие сегменты юзеров стоит захватывать и какие страницы веб-ресурса при этом учитывать. Обязательно нужно использовать счетчик в Яндекс.Метрике.
Читайте также: Что такое Вебвизор в Яндекс.Метрике
После успешного добавления сайта можно приступать к настройке ретаргетинга на странице работы с объявлением. В качестве цели укажите страницу или целый сайт, вставив ссылку в соответствующее поле. Добавьте свои правила, влияющие на показ объявлений, после чего завершите настройку и ознакомьтесь с прогнозируемым количеством посетителей.
Выбор автоматической стратегии показа объявлений
Я разберу три варианта автоматической стратегии показа контекстной рекламы в Директе. Каждый из них подходит только опытным рекламодателям, а на начальных этапах работы с системой всегда указывается ручной тип управления ставками. Учитывайте, что каждая стратегия имеет свой уровень эффективности, и оптимальные показатели достигаются только спустя определенное время, поэтому может понадобиться несколько недель на выход к нужному значению.
Оптимизация кликов
Первый тип называется «Средняя цена клика». Оптимален для пользователей, не желающих тратить на рекламу больше конкретной суммы в неделю. При настройке обязательно указывается определенная цифра, а система автоматически устанавливает величину ставок, отдавая предпочтение максимальному числу пользователей для привлечения.
Недостаток этого варианта стратегии – невозможность заранее спрогнозировать верную среднюю ставку, поскольку иногда наступает резкий рост конкуренции или на рынок приходят рекламодатели с более широкими кошельками, из-за чего должного результата достичь не удается.
Оптимизация конверсии
Главное отличие этой стратегии от предыдущей – плата взимается не просто за переход пользователя на сайт, а за его действия там. Для этого понадобится использовать Яндекс.Метрику, чтобы отслеживать действия юзеров и понимать, насколько эффективной будет стратегия при выборе определенных целей.
Этот вариант сложнее в плане реализации, поскольку необходимо выполнить определенные расчеты, учитывая недельный бюджет и примерную эффективность показа объявлений.
Оптимизация рентабельности
Если вы являетесь владельцем интернет-магазина, обратите внимание на эту стратегию. Она пригодится, если нужно управлять ROI и следить за окупаемостью, приближая значения к целям. Здесь тоже нужно использовать Метрику, установив соответствующие цели. При выборе этой стратегии доступно несколько параметров: цена за клик, недельный бюджет и процент от себестоимости товара.
Знакомство с Директ Коммандер
В завершение расскажу о полезном приложении для тех, кто занимается развертыванием полномасштабной рекламной кампании и нуждается в специальных инструментах для более гибкого управления всеми объявлениями. Детально рассказывать об этом средстве нет смысла, поскольку оно только косвенно относится к тематике статьи. Вместо этого советую ознакомиться с инструкцией на официальном сайте, чтобы понять, как функционирует ПО и нужно ли оно вам.
Я постарался детально рассказать о том, что такое реклама в Яндекс.Директ, как настроить свое первое объявление и какую стратегию развития выбрать. Конечно, абсолютно все детали раскрыть не получится, поскольку это сложная тема.
Помните о том, что вы всегда можете воспользоваться услугами сертифицированных специалистов, которые значительно быстрее приведут созданную кампанию к успеху.
Argus Direct | Argus Media
О платформе ARGUS Direct
®Платформа Argus Direct представляет собой наилучший вариант доступа к нашим изданиям, котировкам, аналитическим материалам, фундаментальным показателям рынка и новостям. При помощи Argus Direct вы всегда можете быть в курсе всех событий на любом рынке.
Argus Direct – это полностью настраиваемая платформа, которая имеет следующие функции и возможности:
- Издания: Доступ к новым выпускам изданий и архиву публикаций.
- Цены: Функции выбора отображаемых котировок и экспорта текущих и архивных данных позволят вам быстро изучить динамику различных показателей рынка.
- Графики и таблицы: Вы можете самостоятельно создавать графики и таблицы для сравнения различных рынков и отслеживать возможности арбитражных поставок.
- Новости и аналитика: Выделение ключевых новостей и возможность фильтрации и выбора наиболее актуальных тем и регионов.
- Поиск: Функция поиска позволяет вам быстро находить нужные вам издания, цены и статьи.
- Уведомления: Вы можете настроить отправку уведомлений, которые будут приходить на ваш компьютер, мобильный телефон или на электронную почту. Уведомления позволят вам получать необходимые котировки и статьи сразу после их публикации.
- Данные и материалы для скачивания: Возможность мгновенного доступа к аналитическим показателям рынка.
Интуитивно понятный интерфейс платформы можно легко настроить, и пользователь может быстро создать свою индивидуальную информационную панель. Вы можете быстро редактировать и добавлять графики и таблицы, выбирать отображаемый архив цен, изменять валюту и настраивать ленту новостей. При помощи Argus Direct вы всегда можете быть в курсе всех событий на любом рынке.
Кроме того, вам доступны дополнительные способы получения и использования нашей информации: надстройка для Excel Argus Direct for Spreadsheets и приложение Argus Publications App, которые дают доступ к большему количеству информации.
Войти в Argus Direct
Яндекс.Директу, Google Ads и инструментам автоматизации
Информации по контексту так много, что легко потеряться. Особенно новички сильно рискуют потратить время на маловажные материалы и пропустить действительно годный контент. Подборка источников знаний по контекстной рекламе для РРС-специалистов — начинающих и продолжающих.
Чтобы обучение контекстной рекламе (и развитие вас как PPC-специалиста) шло быстро и эффективно, мы приготовили подборку полезных проверенных ресурсов. Критерии выбора: экспертная и полезная информация, известность и квалификация компании или автора, активность и актуальность публикаций.
Официальные ресурсы рекламных систем
1. Справка по «Google Рекламе». Коротко и сухо о начале работы, управлении объявлениями, оплате и пр. Есть пошаговые инструкции и информация о сертификации. У Google Ads есть официальная страница в VK, где выходят обновления, советы, статьи. Чтобы следить за новостями, можно также подписаться на рассылку.
2. Яндекс.Помощь – Директ. Правила, обзоры форматов и стратегий, порядок расчета и т. д. Справку хорошо смотреть в процессе работы, но для обучения с нуля больше подойдет «Школа Директа». Там есть базовые уроки для специалистов и курс о том, как выбрать подрядчика. Еще можно получать новости Директа и других рекламных технологий, а также анонсы обучающих мероприятий, на почту, для этого необходимо подписаться на рассылку.
Новости PPC, нишевые издания
3. Ppc.world — портал о работе с платным трафиком и интернет-рекламой. Вас ждут статьи по Яндекс.Директу, Google Ads, веб-аналитике, новости и афиша мероприятий, курсы и вакансии.
Ссылки: сайт, VK, FB, Telegram.
4. Searchengines — один из первых порталов Рунета об интернет-маркетинге. На сайте, в социальных сетях и рассылке проекта вы найдете новости Google и Яндекса, отчеты по теме поискового маркетинга, статьи о настройке контекстной рекламы.
Ссылки: сайт, форум, рассылка, VK, FB, Twitter, Telegram.
Рекомендуем прочитать
35+ ресурсов для обучения SEO и развития в профессии
Блоги, социальные сети, каналы экспертов
5. Айнур Талгаев – специалист по Google Ads, обещает решить любой вопрос, связанный с этим инструментом. В своем «нелегально-аморальным и криминальном» блоге публикует кейсы, ответы на вопросы и новости. Во ВКонтакте размещаются промокоды, вакансии, объявления о купле-продаже аккаунтов.
6. Дмитрий Тонких — PPC-специалист, ведет авторский Telegram-канал по скриптам Google Ads: новости, полезные советы и решения по теме.
7. Евгения Дуброва-Аликсюк — специалист по контекстной рекламе, автор Telegram-канала Webmagic. Здесь вы найдете полезные новости из мира PPC и веб-аналитики.
8. Яков Осипенков — экс-PPC-специалист в ConvertMonster и Kokoc, автор блога про контекстную рекламу и веб-аналитику. Есть сайт с сотней статей и его филиалы в VK, Telegram.
9. Татьяна Михальченко — специалист по контекстной рекламе, преподаватель, автор проекта PPC.Webanalytics со своими Telegram-каналом, страницы в FB и VK). Основной формат — ежедневный дайджест статей по контекстной рекламе и веб-аналитике. Полезно читать и клиентам, и специалистам.
10. Константин Сентищев — эксперт по Ads, ведет паблик в VK о секретах Google Ads: статьи, ответы на вопросы подписчиков, скринкасты.
11. Кирилл Никулин — CEO агентства контекстной рекламы Red Meteors. Новостями и статьями об интернет-рекламе он делится в телеграм-канале PPC Life (вместе с Евгенией Аликсюк). У автора есть еще второй канал с лайфхаками, но тот не обновлялся с января.
12. Алексей Ярошенко — сертифицированный специалист Google Ads и Analytics. Ведет блог о контекстной рекламе и аналитике, а в FB еще репостит коллег, постит ссылки на интервью и мероприятия.
Ресурсы агентств и сервисов
13. eLama — платформа автоматизации контекстной рекламы. В блоге публикуются новости отрасли, руководства по запуску и оптимизации рекламных кампаний, конспекты вебинаров.
Ссылки: сайт, VK, FB, Twitter, Telegram, YouTube
14. Yagla — инструмент настройки и ведения PPC-кампаний методом гиперсегментации. На своих страницах представители компании затрагивают важные темы для любого специалиста: конверсия лендинга, попадание в целевую аудиторию, показатели эффективности и др. Там можно найти не только руководства, но и реальные кейсы.
Ссылки: сайт, VK, FB, YouTube
15. PPC-help — инструменты для работы с контекстной рекламой для профессионалов. Блога нет, а в социальных сетях публикуются новости, скрипты, подборки креативов, ссылки на полезные статьи и инструменты.
Ссылки: VK, Twitter.
16. Seodroid — сервис оптимизации и автоматизации рекламы в Яндекс.Директе. Представители компании работают над подборками, гайдами, дайджестами и иногда конспектами лекций.
Ссылки: сайт, VK
17. Click.ru — профессиональные инструменты для PPC-специалистов, автоматизация контекстной и таргетированной рекламы с выгодной партнерской программой. В блоге — ежемесячные дайджесты новостей, руководства по настройке и оптимизации, подборки полезностей.
Ссылки: сайт, VK, FB, Telegram, YouTube
18. PPC Hero — зарубежный блог о платном трафике от агентства Hanapin Marketing: советы по PPC и стратегии, новости инструментов Google и анонсы обучающих мероприятий.
Ссылки: сайт
19. UAAteam — украинское digital-агентство. В блоге в основном руководства, инструкции, подборки о платной рекламе на поиске и в контекстно-медийных сетях. За новыми статьями можно следить и в социальных сетях.
Ссылки: сайт, FB, YouTube
20. Sotnik — агентство контекстной рекламы, ведет тематический блог на сайте и делится статьями в социальных сетях. Про Директ и Facebook Ads мало, в основном речь о продуктах Google.
Ссылки: сайт, FB, Twitter, YouTube
21. Penguin Team — аутсорс-агентство из Украины — ведет блог, в котором материалы преимущественно посвящены контекстной рекламе. Как правило, это гайды и инструкции.
Ссылки: сайт, FB
Также статьи о контекстной рекламе есть в блоге Cybermarketing, их можно найти по соответствующему хештегу.
Специализированные коммьюнити
22. Контекстная реклама — закрытое сообщество в Facebook, насчитывает около 8 500 участников. Аудитория — профессионалы-контекстологи и желающие ими стать. Флуд и вакансии запрещены, реклама по согласованию.
23. PPC Chat — Telegram-чат для обсуждений, вопросов и ответов по теме Директа, Ads, Метрики и Analytics. Количество подписчиков уже перевалило за 3 000.
24. CPC Real Talk — в этой Telegram-группе призывают задавать любые вопросы по контекстной рекламе (и получать на них ответы). Подписались уже 2 200 человек. За рекламу, вакансии, флуд — бан.
25. AdWords на раз два — специализированный чат по «Google Рекламе», в основном делятся советами и обсуждают арбитраж.
Онлайн-курсы
26. Контекстная реклама — бесплатный видеокурс от Cybermarketing. Преподает Дмитрий Климчуков, сертифицированный специалист по Яндекс.Директу и Google Рекламе. В программе 6 уроков, в конце — сертификат.
27. Специалист по Яндекс.Директу / Google Ads — два бесплатных видеокурса на портале PPC.World. Занятия ведут эксперты по обучению и сертифицированные специалисты.
28. Подготовка к сертификации Яндекс.Директ и Google Ads — бесплатные онлайн-курсы Нетологии, направленные на конечный результат: сдачу экзамена и право считаться квалифицированным специалистом. Занятия идут 8 и 13 дней соответственно.
29. Контекстная реклама: локомотив для бизнеса — интенсив от Cybermarketing, углубленный курс Дмитрия Климчукова по Яндекс.Директу, Google Ads и веб-аналитике. Логичное продолжение предыдущего бесплатного видеокурса. Интенсив идет 1 месяц и стоит 20 000 р. со скидкой. Кстати, его можно посетить не только онлайн, но и очно — в Москве.
30. Весь контекст за 4 месяца — авторский онлайн-практикум от Ильи Исерсона, одного из сильнейших экспертов по контекстной рекламе в Рунете. Цена участия — 43 000 р.
31. Эффективная контекстная реклама — программа подготовки от учебного центра Unibrains, разработана при поддержке экспертов по обучению Яндекса и Google. Занятия очные, проходят в РЭУ им. Г.В. Плеханова. Курс идет 3 месяца, стоит 70 000 р.
Конференции
32. PPC Day — бесплатная онлайн-конференция от Webpromoexperts, которая посвящена контекстной рекламе. В этом году прошла в июне, можно купить записи. В числе спикеров: Олег Поддубный, Константин Найчуков, Андрей Осипов.
33. CyberPPCDay — тоже бесплатная онлайн-конференция, только от Cybermarketing. В этом году еще не было, есть записи предыдущего мероприятия (само собой, многое еще актуально). С докладами выступили Илья Исерсон, Роман Рыбальченко и другие эксперты.
34. SEMconf — уже платная конференция про контекстную рекламу, мобильный маркетинг, управление агентством. Есть два формата: онлайн и офлайн в Москве. Участие стоит от 7 500 р. Ближайшее мероприятие в октябре.
Как Healthdirect может вам помочь
Прочтите эту статью на следующих языках: арабский, бенгальский, китайский упрощенный, китайский традиционный, вьетнамский
healthdirect предоставляет бесплатную надежную информацию и советы о здоровье 24 часа в сутки, 7 дней в неделю.
Экстренная ситуация — что мне делать?
Если вы считаете, что вам нужна скорая помощь, или ваша травма или заболевание является критическим или опасным для жизни, немедленно вызовите скорую помощь Triple Zero (000).
Мне нужен совет по здоровью — у вас есть телефон доверия?
Да, есть. Позвоните по бесплатному телефону доверия * 1800 022 222 . Наши дипломированные медсестры доступны 24 часа в сутки, 7 дней в неделю, чтобы проконсультировать вас, когда вы не знаете, что делать — стоит ли вам обратиться к местному терапевту, лечить заболевание дома или обратиться в отделение неотложной помощи.
Приемная закрыта. Могу ли я получить помощь?
Да, можно. Позвоните по бесплатному телефону горячей линии * 1800 022 222 , чтобы получить информацию о том, куда обратиться за помощью в вашем районе.Если рядом с вами нет открытых терапевтов, наши дипломированные медсестры могут предложить вам перезвонить или сделать видеозвонок от терапевта, который может дать совет.
Мне нужна помощь, чтобы получить доступ к healthdirect
- Если у вас нарушение слуха или речи, позвоните в Национальную службу ретрансляции по телефону 1800 555 677 и попросите перевести вас в healthdirect.
- Если английский не является вашим основным языком и вам нужен переводчик, позвоните в TIS National по номеру 131 450 и попросите перевести вас в healthdirect.
Могу ли я получить консультацию по здоровью в Интернете?
Да, используйте онлайн-программу Healthdirect Symptom Checker . Он проведет вас через ряд простых вопросов, которые помогут вам понять ваши симптомы, и предоставит советы о том, что делать — следует ли вам обратиться к местному терапевту, управлять заболеванием дома или обратиться в отделение неотложной помощи.
Где моя ближайшая медицинская служба?
Средство поиска услуг healthdirect обеспечивает быстрый и легкий доступ к самому полному каталогу медицинских услуг и поставщиков в Австралии.Результаты поиска зависят от местоположения, что позволяет найти ближайшего врача, аптеку, физиотерапевта и т. Д.
Где я могу получить достоверную информацию о здоровье в Интернете?
Веб-сайт healthdirect предоставляет надежную онлайн-информацию об огромном спектре проблем со здоровьем, включая состояния, симптомы, методы лечения, медицинские услуги и многое другое.
Мы тесно сотрудничаем с ведущими организациями здравоохранения Австралии, и вся наша информация проходит тщательную клиническую проверку.
Есть ли у healthdirect мобильное приложение?
Конечно! Вы можете загрузить приложение healthdirect из Google Play или iTunes.
Приложение обеспечивает удобный доступ к достоверной информации о здоровье и позволяет вам проверять свои симптомы и находить медицинские услуги одним нажатием клавиши.
* может взиматься плата за звонки с мобильных телефонов и таксофонов.
Приложение HealthdirectДомашняя страница справочного центра KDP
Найдите помощь там, где она вам нужна.Вы можете использовать строку поиска выше или перемещаться по темам, используя меню слева.
Новости и последние обновления
Вот что нужно знать:
. | Публикация сериализованных историй с помощью Kindle Vella | |
. | Kinde Vella — это новый вариант повествования, при котором вы можете публиковать сериализованные рассказы, по одному эпизоду за раз. В ближайшие несколько месяцев читатели смогут получить доступ к историям Kindle Vella в приложении Kindle для iOS и на Amazon.com. Начните писать сегодня, чтобы ваш рассказ был готов и ждал читателей. Узнать больше | |
. | . | |
. | Создайте свою собственную страницу серии Amazon | |
. | Превратить вашу книжную коллекцию в серию стало еще проще. Вы можете создавать, редактировать или удалять серию. Вы даже можете добавлять или удалять книги из серии. Есть много новых функций, так что узнайте, с чего начать. | |
. | . | |
. | Предстоящие вебинары | |
. | Мы проводим серию веб-семинаров, чтобы помочь вам подготовить, опубликовать и продвигать свои книги. Присоединяйтесь к нам на интерактивную 60-минутную сессию, где вы можете задать вопросы и найти правильный путь к тому, чтобы стать автором бестселлеров. Просмотреть доступные вебинары |
Ты новенький?
Вот несколько шагов для начала:
Что такое ДПК? Узнайте, подходит ли KDP для публикации вашей книги. Узнать больше | Отформатируйте книгу Подготовьте обложку и рукопись для публикации. Мягкая обложка | электронная книга | Создать книгу на KDP Воспользуйтесь нашим пошаговым руководством для создания своей первой книги. Узнать больше |
Популярные темы
Как сделать прямое сообщение (DM) в Twitter
Ваш браузер не поддерживает элемент video
.
— это личная часть Twitter. Вы можете использовать личные сообщения для личных бесед с людьми о твитах и другом контенте.
Основы
Чтобы отправить личное сообщение из Twitter для iOS
Для отправки прямого сообщения из Twitter для Android
Для отправки личного сообщения через Интернет
Чтобы отложить уведомления о личных сообщениях
Чтобы сообщить о личном сообщении или разговоре
Чтобы поделиться твитом через личное сообщение
Для получения личных сообщений от кого угодно
Для просмотра запросов в личном сообщении
Для отключения уведомлений о прочтении личных сообщений
Для отправки и получения личных сообщений на свой телефон с помощью SMS
Некоторые важные сведения о личных сообщениях
Основы
- Вы можете начать личный разговор или создать групповой разговор со всеми, кто следит за вами.
- Любой, на кого вы не подписаны, может отправить вам личное сообщение, если:
- Вы согласились получать личные сообщения от кого-либо или;
- Вы ранее отправляли этому человеку личное сообщение.
- Любой участник беседы может отправлять личные сообщения группе. Все в группе могут видеть все сообщения, даже если все не подписываются друг на друга.
- В групповых беседах любой участник беседы может добавлять других участников. Недавно добавленные участники не увидят предыдущую историю беседы.
- Некоторые учетные записи, особенно предприятия в Twitter, позволяют получать личные сообщения от кого угодно. Вы можете отправить личное сообщение этим аккаунтам, даже если они не подписаны на вас.
- Как в групповых беседах, так и в беседах один на один вы не можете участвовать в беседе с заблокированной учетной записью.
Чтобы отправить личное сообщение из Twitter для iOS
- Коснитесь значка конверта . Вы будете перенаправлены на ваш сообщений .
- Нажмите значок сообщения , чтобы создать новое сообщение.
- В поле адреса введите имена или @username (а) людей, которым вы хотите отправить сообщение. Групповое сообщение может включать до 50 человек.
- Введите свое сообщение.
- В ваше личное сообщение можно не только текст, но и фото, видео или GIF. На панели создания сообщения или значке плюс вы можете получить доступ к следующим параметрам:
- Коснитесь значка фото , чтобы сделать фотографию или записать видео, либо прикрепите фотографию из галереи устройства.У вас есть возможность отредактировать свою фотографию перед отправкой сообщения. Нажмите на фотографию, чтобы открыть экран редактирования, где вы можете улучшить, обрезать и добавить фильтры. Когда вы закончите редактирование, нажмите Сохранить . Узнайте больше о дополнительных параметрах фото.
- Чтобы включить анимированный GIF в сообщение, нажмите значок GIF , чтобы найти и выбрать файл в медиатеке.
- Чтобы отправить сообщение, нажмите бумажный самолетик значок
Чтобы удалить личное сообщение или беседу:
- Чтобы удалить личное сообщение, нажмите и удерживайте сообщение и выберите Удалить сообщение во всплывающем меню.
- Чтобы удалить всю беседу из папки «Входящие», проведите пальцем влево по беседе и коснитесь значка корзины . Вы также можете удалить всю беседу, нажав на значок информации и выбрав Удалить беседу из информации о беседе страница.
- Когда вы удаляете личное сообщение или беседу (отправленную или полученную), она удаляется только из вашей учетной записи. Другие участники беседы по-прежнему смогут видеть личные сообщения или беседы, которые вы удалили.
Для управления групповым разговором:
- Для быстрого доступа к списку участников беседы коснитесь фотографии групповой беседы профиля в папке «Входящие».
- В групповом разговоре нажмите значок информации , чтобы открыть страницу настроек.
- Сведения о настройках:
- Нажмите Изменить , чтобы обновить фотографию и имя профиля группового разговора. Чтобы изменить фотографию, коснитесь значка камеры на фотографии на Выберите из библиотеки или Сделайте новую фотографию .Нажмите Сохранить для обновления.
Примечание : после обновления фотографии у вас будет возможность Удалить текущую фотографию , Просмотреть текущую фотографию , Выбрать из библиотеки или Сделать новую фотографию . - Нажмите Добавить участников , чтобы добавить людей в беседу.
- Перетащите ползунок рядом с Отложить разговор , чтобы отложить уведомления на 1 час , 8 часов , 1 неделю или Навсегда .
- Перетащите ползунок рядом с Отложить упоминание , чтобы указать, будете ли вы получать уведомления при упоминании в групповом разговоре. Обратите внимание, что, если эта функция не включена, вы будете получать уведомления, когда вы прямо упомянуты в беседе, даже если вы включили функцию Отложить беседу . Кроме того, вы должны быть участником группового разговора, чтобы получать уведомления об упоминании этого разговора.
- Чтобы сообщить о групповом разговоре, коснитесь Сообщить о разговоре .
- Чтобы удалить себя из группового разговора, нажмите Выйти из разговора .
- Нажмите Изменить , чтобы обновить фотографию и имя профиля группового разговора. Чтобы изменить фотографию, коснитесь значка камеры на фотографии на Выберите из библиотеки или Сделайте новую фотографию .Нажмите Сохранить для обновления.
Чтобы отправить личное сообщение из Twitter для Android
- Коснитесь значка конверта . Вы будете перенаправлены к своим сообщениям.
- Нажмите значок сообщения , чтобы создать новое сообщение.
- В поле адреса введите имена или @username (а) людей, которым вы хотите отправить сообщение. Групповое сообщение может включать до 50 человек.
- Введите свое сообщение.
- Помимо текста, вы можете добавить фото, видео или GIF через личное сообщение.
- Нажмите значок фото , чтобы сделать снимок или записать видео, либо прикрепите его из галереи устройства. Перед отправкой сообщения у вас есть возможность отредактировать свою фотографию через приложение Twitter для iOS или Twitter для Android. Нажмите на фотографию, чтобы открыть экран редактирования, где вы можете улучшить, обрезать и добавить фильтры. Когда вы закончите редактирование, нажмите Сохранить .Узнайте больше о дополнительных параметрах фото.
- Чтобы включить анимированный GIF в сообщение, нажмите значок GIF , чтобы найти и выбрать файл в медиатеке.
- Нажмите значок фото , чтобы сделать снимок или записать видео, либо прикрепите его из галереи устройства. Перед отправкой сообщения у вас есть возможность отредактировать свою фотографию через приложение Twitter для iOS или Twitter для Android. Нажмите на фотографию, чтобы открыть экран редактирования, где вы можете улучшить, обрезать и добавить фильтры. Когда вы закончите редактирование, нажмите Сохранить .Узнайте больше о дополнительных параметрах фото.
- Коснитесь значка отправить .
Чтобы удалить личное сообщение или беседу:
- Чтобы удалить личное сообщение, нажмите и удерживайте сообщение и выберите Удалить сообщение во всплывающем меню.
- Чтобы удалить всю беседу из папки «Входящие», нажмите и удерживайте беседу и выберите Удалить беседу .Вы также можете удалить всю беседу, нажав значок информации и выбрав Удалить беседу на странице Информация о беседе .
- Когда вы удаляете личное сообщение или беседу (отправленную или полученную), она удаляется только из вашей учетной записи. Другие участники беседы по-прежнему смогут видеть личные сообщения или беседы, которые вы удалили.
Для управления групповым разговором:
- Для быстрого доступа к списку участников беседы коснитесь фотографии профиля группового разговора в папке «Входящие».
- В групповом разговоре нажмите значок информации , чтобы открыть страницу настроек.
- Сведения о настройках:
- Нажмите Изменить , чтобы обновить фотографию и имя профиля группового разговора. Коснитесь значка камеры , чтобы открыть следующие параметры фотографии: Просмотр фотографии , Камера , Фотогалерея или Удалить фотографию . Нажмите Сохранить для обновления.
- Нажмите Добавить участников , чтобы добавить людей в беседу.Создателем группы является администратор по умолчанию. Если создателя больше нет в группе, первый член, который присоединится к группе после администратора, станет администратором. Как администратор группы вы можете удалять участников из группы.
- Нажмите Отложить разговор , чтобы отложить уведомления на 1 час , 8 часов , 1 неделю или Forever .
- Установите флажок рядом с Отложить упоминание , чтобы указать, будете ли вы получать уведомления, когда вас упоминают в групповом разговоре.Обратите внимание, что, если эта функция не включена, вы будете получать уведомления, когда вы прямо упомянуты в беседе, даже если вы включили функцию Отложить разговор . Кроме того, вы должны быть участником группового разговора, чтобы получать уведомления об упоминании этого разговора.
- Чтобы сообщить о групповом разговоре, коснитесь Сообщить о разговоре .
- Чтобы удалить себя из группового разговора, нажмите Выйти из разговора .
Для отправки личного сообщения через Интернет
- Щелкните Сообщения на левой панели навигации.
- Вы увидите историю личных сообщений. Щелкните значок Новое сообщение вверху.
- В поле адреса введите имена или @username (а) людей, которым вы хотите отправить сообщение. Групповое сообщение может включать до 50 человек.
- Нажмите Далее
- В окне сообщения вы можете добавить фотографию, видео, GIF или эмодзи с помощью прямого сообщения:
- Щелкните значок фотографии, чтобы загрузить фотографию или видео.
- Чтобы включить анимированный GIF в сообщение, нажмите значок GIF, чтобы найти и выбрать файл в медиатеке.
- Нажмите кнопку Отправить или нажмите клавишу ввода, чтобы отправить.
Примечание : Чтобы начать новую строку в сообщении, одновременно нажмите клавиши Shift и Enter. Нажатие только клавиши ввода отправит ваше сообщение.
Чтобы удалить личное сообщение или беседу:
- Чтобы удалить личное сообщение, щелкните сообщение и выберите Удалить .
- Чтобы выйти из беседы, найдите беседу и щелкните ее, чтобы открыть. Щелкните значок информации и выберите Выйти из разговора .
- Когда вы удаляете личное сообщение или выходите из беседы (отправленной или полученной), она удаляется только из вашей учетной записи. Другие участники беседы по-прежнему смогут видеть личные сообщения или беседы, которые вы удалили.
Для управления групповым разговором:
- В групповом разговоре щелкните значок информации , чтобы получить доступ к настройкам разговора:
- На странице Информация о группе щелкните значок еще для доступа к раскрывающемуся меню.Вы можете выбрать Изменить название группы , Загрузить новую фотографию , Просмотреть фотографию, или Удалить фотографию .
Примечание: Возможность просмотра и удаления фотографии будет доступна только в том случае, если загружена фотография группового сообщения.
- На странице Информация о группе щелкните значок еще для доступа к раскрывающемуся меню.Вы можете выбрать Изменить название группы , Загрузить новую фотографию , Просмотреть фотографию, или Удалить фотографию .
- В разделе «Уведомления » вы можете выбрать:
- Нажмите Отложить уведомления , чтобы отложить уведомления на 1 час , 8 часов , 1 неделя или Навсегда .
- Щелкните Отложить упоминание , чтобы указать, будете ли вы получать уведомления при упоминании в групповом разговоре. Обратите внимание, что, если эта функция не включена, вы будете получать уведомления, когда вы прямо упомянуты в беседе, даже если вы включили функцию Отложить разговор . Кроме того, вы должны быть участником группового разговора, чтобы получать уведомления об упоминании этого разговора.
- Чтобы сообщить о групповом разговоре, щелкните Сообщить о разговоре .
- Чтобы удалить себя из группового разговора, щелкните Выйти из разговора .
Чтобы отложить уведомления о личных сообщениях
Вы можете отложить уведомления для личных сообщений на 1 час , 8 часов , 1 неделю или Forever . Когда вы откладываете разговор в личном сообщении, вы все равно будете получать новые сообщения, но не будете получать уведомления каждый раз. Примечание: Если Snooze не упоминает, что параметр включен, вы все равно будете получать уведомления, когда вы прямо упомянуты в групповом разговоре, участником которого вы являетесь.
Как отложить изнутри беседы в личном сообщении на twitter.com, Twitter для iOS и Twitter для Android:
- Перейдите к личному сообщению, которое хотите отложить.
- Щелкните или коснитесь параметров сообщения.
- Щелкните или коснитесь значка информации , затем выберите Отложить уведомления .
- Во всплывающем меню выберите желаемый интервал времени повтора сигнала: 1 час , 8 часов с, 1 неделя или Forever .
- Чтобы отменить откладывание, щелкните или коснитесь значка информации , затем щелкните или коснитесь ползунка для уведомлений об отсрочке .
Как отложить звонок из папки входящих сообщений в Twitter для iOS:
- Перейдите в папку «Входящие» в личном сообщении.
- Найдите разговор, который хотите отложить.
- Проведите пальцем влево по сообщению и коснитесь значка уведомлений
Примечание : вы также можете выбрать сообщить или удалить беседу, проведя пальцем влево. - Во всплывающем меню выберите желаемый интервал времени повтора: 1 час , 8 часов , 1 неделя или Forever .
- Чтобы отменить откладывание, смахните влево и коснитесь отложенных уведомлений значок
Как отложить звонок из папки входящих сообщений в Twitter для Android:
- Перейдите в папку «Входящие» в личном сообщении.
- Найдите разговор, который хотите отложить.
- Нажмите и удерживайте сообщение и коснитесь Отложить уведомления .
- Во всплывающем меню выберите желаемый интервал времени повтора: 1 час , 8 часов , 1 неделя или Forever .
- Чтобы отменить откладывание, нажмите и удерживайте сообщение и коснитесь Отключить уведомления .
Как отложить звонок из push-уведомления в личном сообщении:
- Найдите push-уведомление прямого сообщения на экране блокировки вашего мобильного устройства, которое вы хотите отложить:
- Из приложения Twitter для iOS: проведите пальцем влево по push-уведомлению на экране блокировки, коснитесь Просмотреть , затем коснитесь Отложить на 1 час .
- В приложении Twitter для Android: проведите вниз по push-уведомлению на экране блокировки, затем коснитесь Отложить .
- Уведомления о разговоре будут отложены на один час.
Чтобы сообщить о личном сообщении или разговоре
Вы можете пожаловаться на отдельное сообщение или на всю беседу. Узнайте, как сообщить о нарушениях в твите или личном сообщении.
Чтобы поделиться твитом через личное сообщение
Отправка твита через личное сообщение — отличный способ завязать разговор с группой друзей.
Для получения личных сообщений от кого угодно
Вы можете получать сообщения от кого угодно, если установите флажок рядом с Разрешить запросы сообщений от всех в настройках конфиденциальности и безопасности на сайте twitter.com. Вы также можете настроить этот параметр через Twitter для iOS или Twitter для приложений Android. Если вы включите эту опцию, любой сможет отправлять вам сообщения и добавлять вас в групповые беседы.
Чтобы изменить настройки с помощью Twitter для iOS:
- Коснитесь меню навигации .
- Выберите Настройки и конфиденциальность .
- Tap Конфиденциальность и безопасность .
- В разделе Личные сообщения и рядом с Разрешить запросы сообщений от всех перетащите ползунок, чтобы разрешить кому угодно отправлять вам личные сообщения.
Чтобы изменить настройки с помощью Twitter для Android :
- В верхнем меню вы увидите либо значок меню навигации , либо значок вашего профиля . Коснитесь любого значка, который у вас есть.
- Выберите Настройки и конфиденциальность .
- Tap Конфиденциальность и безопасность .
- В разделе Личные сообщения и рядом с Получать сообщения от кого угодно установите флажок, чтобы разрешить кому угодно отправлять вам личные сообщения.
Чтобы изменить настройки с помощью Twitter для twitter.com:
- Щелкните значок Еще на панели навигации.
- Выберите Настройки и конфиденциальность .
- Tap Конфиденциальность и безопасность .
- В разделе Личные сообщения и рядом с Получать сообщения от кого угодно установите флажок, чтобы разрешить кому угодно отправлять вам личные сообщения.
Примечание. Отключение параметра Получать сообщения от кого-либо параметра не помешает вам продолжать получать личные сообщения от того, на кого вы не подписаны, если у вас уже был установлен предыдущий разговор с этим человеком.Вам нужно будет либо сообщить о разговоре, либо заблокировать учетную запись, чтобы перестать получать личные сообщения от этого человека.
Для просмотра запросов в личном сообщении
Если у вас включен параметр Получать сообщения от кого-либо , входящие сообщения от людей, на которых вы не подписаны, будут отображаться как Запросы на вкладке Сообщения . Новые групповые беседы, в которые вас добавили люди, на которых вы не подписаны, также появятся в Запросах .При входе в диалог вам будет предложено Удалить или Принять сообщение. Принятие сообщения позволит вам общаться с этим человеком и переместит сообщение в ваш почтовый ящик. Обратите внимание, что они не узнают, что вы видели сообщение, пока вы не примете их запрос.
Удаление сообщения приведет к его удалению из вашего почтового ящика. Примечание : Удаление сообщения не помешает этой учетной записи отправлять вам сообщения в будущем. У вас всегда будет возможность заблокировать учетную запись или сообщить о разговоре.Заблокированные учетные записи не могут отправлять вам сообщения, пока вы их не разблокируете.
Принятие сообщения позволит вам общаться с человеком. Все медиа будут скрыты до принятия сообщения. Если вы хотите просмотреть скрытые медиафайлы, щелкните или коснитесь Просмотреть медиафайлы .
Примечание. Возможность Принять или Удалить сообщения и Просмотреть мультимедиа от кого-то нового, на кого вы не подписаны, доступна только в Twitter для приложений iOS и Android, а также в Twitter.com.
Кроме того, по умолчанию мы фильтруем запросы более низкого качества из раздела Запросы вашего почтового ящика для приложения Twitter для iOS и Android. Если этот параметр включен, фильтр качества для запросов сообщений скрывает запросы разговора, которые, по нашему мнению, могут быть более низкого качества. Вы не будете получать уведомления об отфильтрованных запросах, но эти сообщения по-прежнему будут доступны для просмотра за фильтром низкого качества, который существует в нижней части раздела Запросы вашего почтового ящика.
Чтобы отключить или включить фильтр качества для запросов сообщений:
- В верхней части вкладки Запросы нажмите Изменить настройки .
- В разделе Конфиденциальность сообщения настройки , переключите ползунок рядом с Фильтр качества .
Графические носители
Как фильтровать графические материалы в личных сообщениях
Фильтр включен по умолчанию и будет работать следующим образом:
- Будет отображаться предупреждение поверх графического носителя в прямых переписках, как для людей, на которых вы подписаны, так и для неизвестных отправителей.Кроме того, если оно отправлено кем-то, на кого вы не подписаны, мы будем рассматривать его как спам и перемещать его в конец вашего почтового ящика Request .
- Если этот параметр выключен, и вы получаете графическое сообщение от того, за кем следите, мы будем показывать этот графический носитель таким же образом, как и любое другое изображение, видео или GIF в разговоре, который вы можете получить. Если это от кого-то, на кого вы не подписаны, мы все равно будем отображать предупреждение, потому что мы делаем это со всеми носителями, но оно не будет явно определять носитель как потенциально конфиденциальный / графический.
Примечание. Если у вас включен параметр Разрешить запросы сообщений от всех в разделе Личные сообщения в настройках Конфиденциальность и безопасность , можно отключить и включить фильтр качества в настройках конфиденциальности. Эта функция в настоящее время доступна только на устройствах iOS и Android.
Для отключения уведомлений о прочтении личных сообщений
Личные сообщения содержат уведомления о прочтении, чтобы вы знали, когда люди видели ваши сообщения.Когда кто-то отправляет вам личное сообщение и включен параметр Показывать уведомления о прочтении , все в беседе узнают, когда вы его видели. Этот параметр включен по умолчанию, но вы можете в любой момент отключить его (или снова включить) в настройках. Если вы отключите параметр Показывать уведомления о прочтении , вы не сможете видеть уведомления о прочтении от других людей.
Уведомления о прочтении можно просмотреть только в Twitter для приложений iOS и Android, а также на сайте twitter.com. Однако обратите внимание, что уведомления о прочтении также будут отправляться при просмотре личных сообщений в мобильном Интернете.
Чтобы отключить или включить использование Twitter для iOS:
- В верхнем меню коснитесь значка профиля .
- Выберите Настройки и конфиденциальность .
- Tap Конфиденциальность и безопасность.
- В разделе Личные сообщения и рядом с Показать уведомления о прочтении перетащите ползунок, чтобы выключить или снова включить эту функцию.
Чтобы отключить или включить использование Twitter для Android:
- В верхнем меню вы увидите либо значок меню навигации , либо значок вашего профиля .Коснитесь любого значка, который у вас есть.
- Выберите Настройки и конфиденциальность .
- Tap Конфиденциальность и безопасность .
- В разделе Личные сообщения и рядом с Показать уведомления о прочтении снимите флажок, чтобы отключить эту функцию, или установите флажок, чтобы снова включить.
Чтобы отключить или включить через twitter.com:
- Щелкните значок Дополнительно , затем щелкните Конфиденциальность и безопасность .
- В разделе Конфиденциальность и безопасность и рядом с Показать уведомления о прочтении щелкните поле, чтобы выключить функцию, или щелкните поле, чтобы снова включить.
Примечание. Для разговоров, которые появляются под Запросы , отправитель (и) не сможет увидеть, прочитали ли вы их личные сообщения, если вы не примете беседу.
Для отправки и получения личных сообщений на свой телефон с помощью SMS
Если ваша учетная запись Twitter подключена к вашему мобильному телефону, вы можете отправлять и получать личные сообщения через SMS.
Примечание: Примечание о сбоях в личных сообщениях: Будьте осторожны и убедитесь, что в личных сообщениях, которые вы отправляете через SMS, меньше 160 символов, включая команду d и имя пользователя. Ваш оператор связи может разбить SMS-сообщения длиной более 160 символов на несколько SMS-сообщений. В этом случае второе и все последующие SMS-сообщения будут публиковаться как общедоступные твиты, поскольку они не начинаются с соответствующей текстовой команды ( d имя пользователя ), которая сообщает Twitter, что они являются личными сообщениями, как первое SMS-сообщение.
Некоторые важные сведения о личных сообщениях
- Когда вы удаляете личное сообщение или беседу (отправленную или полученную), она удаляется только из вашей учетной записи.Другие участники беседы по-прежнему смогут видеть личные сообщения или беседы, которые вы удалили. При удалении группового разговора вы покинете эту группу и больше не сможете участвовать.
- Когда вы делитесь ссылкой в личном сообщении, она автоматически обрабатывается и сокращается до ссылки t.co. Узнайте больше о сокращении ссылок. Обратите внимание, что любой, у кого есть сокращенная ссылка t.co, сможет перейти к целевому URL.
- Когда вы делитесь медиафайлами в личном сообщении, они будут видны всем участникам беседы.Обратите внимание, что получатели могут загружать или повторно делиться ссылками на медиафайлы, которыми вы делитесь в личном сообщении. Любой, у кого есть ссылка на медиафайлы, опубликованные в личном сообщении, сможет просматривать содержимое.
Нужна дополнительная информация?
Ознакомьтесь с наиболее часто задаваемыми вопросами о личных сообщениях.
Просмотр личных сообщений в Engage (Instagram) — Справочный центр
Благодаря обработке прямых сообщений Instagram (IG DM) Falcon помогает вам взаимодействовать со своими клиентами прямо там, где они хотят связаться с вами.Присутствуйте в публичных и частных беседах, используя единый рабочий процесс и командную совместную работу, которые предлагает Falcon. Эта статья поможет вам понять, чего ожидать и как начать использовать эту функцию Falcon.
Примечание:
ПоддержкаInstagram Messaging в настоящее время доступна только избранным клиентам Falcon. Пожалуйста, свяжитесь со своим менеджером по работе с клиентами в Falcon для получения дополнительной информации о том, как пройти квалификацию.
В этой статье:
Прямые сообщения Instagram полностью интегрированы с существующей инфраструктурой Engage для взаимодействия с вашими клиентами.Это означает, что вы можете выполнять все действия по обработке личных сообщений Instagram, к которым вы привыкли, например, личные сообщения Facebook в Falcon. Некоторые из выдающихся особенностей:
- Просмотр и обработка разговоров в личных сообщениях, включая большинство общих типов мультимедиа.
- Просматривайте и обрабатывайте ответы на свои истории в Instagram.
- Ответить, назначить, пометить как прочитанное, поставить лайк и пометить в любом разговоре, среди других стандартных действий обработки Falcon.
- Экспорт любого разговора.
- Создание автоматизации Engage.
- Просмотр истории упоминаний (когда ваш канал упоминается в истории другого пользователя)
- Делитесь любыми опубликованными вами постами в Instagram в личном общении.
- Включите действия по обработке в отчет о работе группы оценки.
- Отчет о ярлыках, добавленных в ваши беседы в личных сообщениях.
Прямые сообщения Instagram требуют одобрения Facebook, прежде чем их можно будет включить в Falcon. Одним из важных критериев для доступа является большое количество прямых переписок в вашей учетной записи, среди других критериев выбора, которые полностью зависят от Facebook.Ожидается, что эта функция откроется для всех учетных записей в течение 2021 года.
Чтобы запросить доступ у Facebook на данном этапе развертывания, обратитесь к своему менеджеру по работе с клиентами Falcon для получения дополнительной информации.
После того, как ваша учетная запись IG была предварительно одобрена для доступа, вам нужно будет включить эту функцию как в приложении Instagram, так и в Falcon. Ваш менеджер по работе с клиентами Falcon сообщит вам, был ли предоставлен доступ.
Включение прямых сообщений Instagram из приложения Instagram
Чтобы разрешить доступ для сторонних приложений, таких как Falcon, из приложения Instagram, выполните следующие действия:
- В приложении Instagram переключитесь на соответствующий профиль.
- Коснитесь значка профиля в правом нижнем углу.
- Коснитесь контекстного меню (три строки) в правом верхнем углу.
- Нажмите Настройки > Конфиденциальность > Сообщения .
- Под заголовком «Подключенные инструменты» включите Разрешить доступ к сообщениям .
Затем выполните следующие действия, чтобы включить прямые сообщения Instagram из Falcon.
Включение прямых сообщений Instagram из Falcon
После того, как вы выполнили описанные выше действия, чтобы включить доступ к личным сообщениям из приложения Instagram, потребуется повторное подключение к каналу Instagram.Любой пользователь Falcon с ролью администратора или руководителя группы может выполнять следующие действия:
- В Falcon щелкните изображение своего профиля в левом нижнем углу и выберите в меню Настройки .
- В разделе «Настройки канала» выберите Каналы .
- Выберите Добавить каналы в верхнем правом углу.
- В Instagram выберите Connect .
- При появлении запроса на всплывающем экране войдите в Facebook и нажмите Изменить настройки .
Убедитесь, что все разрешения включены, в частности для Управление и доступ к сообщениям для учетной записи Instagram, подключенной к вашей странице .
- Заполните запрос Facebook. Когда вы вернетесь в Falcon, вы увидите три вкладки. Выберите среднюю вкладку; Подключенные каналы, администрируемые вашей организацией.
- Выберите каналы Instagram, внесенные в белый список для IG DM, и нажмите Connect X Channel (s) в правом нижнем углу.
Теперь вы можете начать работу с личными сообщениями Instagram через модуль взаимодействия Falcon.Следующий раздел этой статьи поможет вам настроить для них ленту Engage.
прямых сообщений Instagram интегрированы в инфраструктуру Engage, как и все другие типы сообщений. Вы можете создавать гибкие каналы, включающие IG DM, на основе вашего личного рабочего процесса. Для начала вот как вы можете создать фид, включающий все IG DM:
- Перейдите к модулю Engage в Falcon.
- Нажмите кнопку Добавить канал в правом верхнем углу.
- Для опции В сети (ах) выберите логотип Instagram.
- Для опции Тип (ов) выберите Прямое сообщение .
- Дайте своему каналу уникальное имя, например Личные сообщения Instagram .
- Щелкните Сохранить канал .
Теперь ваш канал готов к использованию, и вы можете выполнять действия по обработке всех входящих сообщений IG DM. Помните, что вы можете дополнительно настроить свой канал по своему вкусу с помощью других предоставленных параметров канала.
прямых договоров с клиентами — Upwork Customer Service & Support
Прямые контракты — это новое предложение, которое позволяет вам управлять контрактами на платформе Upwork с вашими клиентами, у которых нет учетной записи Upwork.Воспользуйтесь преимуществами услуг условного депонирования, простого управления контрактами, более быстрых платежей и помощи в разрешении споров в случае возникновения проблемы.
Как работают прямые контракты
С помощью прямых контрактов вы можете создавать и отправлять предложения по контрактам своим клиентам, у которых нет аккаунтов Upwork. Как и другие ваши контракты на Upwork, ваш клиент депонирует средства проекта на условное депонирование до начала контракта. Когда вы закончите работу, вы запросите оплату у своего клиента. Как только они примут ваш запрос, средства будут переведены вам.
Как фрилансер, вы платите комиссию за обработку в размере 3,4% от общей суммы контракта, но не платите Upwork какие-либо услуги фрилансера. Вашему клиенту не нужно будет создавать учетную запись Upwork, чтобы им было удобно пользоваться этим интерфейсом.
Обратите внимание, что все транзакции производятся в долларах США.
Чем прямые контракты отличаются от других контрактов с Upwork?
- Может использоваться только с клиентами, у которых нет учетной записи Upwork
- Плата за услуги фрилансера не удерживается, только 3.Комиссия за обработку 4% от суммы контракта
- Вы составляете условия договора и отправляете предложения своему клиенту
- Если у вас есть прямой контракт с фиксированной ценой, как только ваша работа будет одобрена, вам немедленно будут переведены средства (без 5-дневного периода безопасности)
- Вашему клиенту не нужно создавать аккаунт
Управляйте своими прямыми контрактами
Выберите значок «Прямые контракты» на панели навигации.
Отсюда вы можете создавать и отправлять предложения контрактов, запрашивать платежи и отменять контракты, а также просматривать все детали вашего прямого контракта.
Вы можете добавить контрольные точки к своему прямому контракту, чтобы разделить вашу работу на серию этапов, сроков выполнения или результатов в зависимости от ваших потребностей. Вехи финансируются индивидуально и позволяют работать над большим проектом меньшими шагами.
При установке суммы контракта выберите опцию «Вехи», чтобы настроить этапы вашей работы.
Вы также можете управлять своей работой с почасовой оплатой.
Услуги условного депонирования
Вашему клиенту необходимо будет поместить средства на условное депонирование с помощью Upwork Escrow до начала действия контракта.После того, как вы запросите платеж своему клиенту, у него будет 14 дней на то, чтобы принять или отклонить запрос. Если они не предпримут никаких действий по прошествии 14 дней, средства будут автоматически переведены вам.
Важное примечание: И клиенты, и фрилансеры имеют возможность расторгнуть контракт в любой момент до того, как средства будут высвобождены. В любом случае средства возвращаются клиенту в первоначальной форме платежа в течение семи рабочих дней.
Если в течение этих семи рабочих дней фрилансер инициирует спор, контракт приостанавливается.Денежные средства будут храниться на условном депонировании до тех пор, пока спор не будет разрешен.
Сколько стоит мне как фрилансеру?
С фрилансеров взимается комиссия за обработку платежей в размере 3,4%. Например, если ваш доход составляет 100 долларов США, с вас будет взиматься комиссия за обработку платежа в размере 3,40 доллара США. С вас не взимается комиссия за услуги фрилансера, только 3,4%. Обратите внимание, что все транзакции производятся в долларах США.
Как это повлияет на мои показатели активности Upwork (например, оценка JSS, количество контрактов, долларовые доходы, статус Top Rated)?
Поскольку ваш клиент и вы будете использовать Upwork только для платежей, любые прямые контракты не повлияют на ваши показатели репутации Upwork (например, ваш рейтинг успешной работы или статус наивысшего рейтинга).Эти контракты также не будут включены в другую статистику вашего профиля Upwork, такую как общий доход, количество рабочих мест и т. Д.
Могу ли я заключать почасовые контракты и контракты с фиксированной ценой с прямыми контрактами?
Да! Теперь вы можете заключать как почасовые контракты, так и контракты с фиксированной ценой с опцией Прямые контракты.
Куда мне обратиться, чтобы заключить прямой контракт?
Найдите значок бумажного самолетика на панели навигации.
Как подать спор?
Прямые контракты поддерживаются услугами условного депонирования и помощью в разрешении споров.
Если клиент отменил контракт без оплаты или не смог произвести промежуточный платеж, несмотря на выполнение работ, инициируйте спор прямо со страницы списка контрактов. Нажмите «…», затем «Получить помощь» и «Связаться с нами».
Фрилансеры также могут предпринять эти шаги, чтобы подать спор.
Как мне внести изменения в договор?
Вы можете редактироватьпрямых контрактов до тех пор, пока ваш клиент не примет контракт и не профинансирует проект. Если после этого потребуются изменения условий или объема, обратитесь к своему клиенту для обсуждения.Затем вы можете отменить существующий контракт и создать новый.
Как мне отказаться от договора?
Перейдите в Мои вакансии> Прямой контакт, чтобы найти контракт. Нажмите на (…), и вы увидите вариант «Отменить контракт» и добавить персонализированное примечание.
Будет ли это включено в мою налоговую информацию в США, которую Upwork предоставляет мне в конце года?
В большинстве случаев фрилансеры из США, включая тех, кто заработал более 600 долларов, не получат форму 1099-MISC от Upwork или их клиентов.Однако есть три важных исключения:
- Если вы фрилансер из США, зарегистрированный в Upwork Payroll, вы получите W-2
- Если вы фрилансер из США, получивший более 20 000 долларов США и совершивший более 200 транзакций, вы получите 1099-K
- Вы живете в штате США, который требует 1099-K, если вы достигли определенного порога заработка. В таких случаях мы отправим вам 1099-K, если потребуется.
Кроме того, ваш клиент может решить выдать вам налоговую форму, если он считает, что это требуется.Мы рекомендуем всем фрилансерам использовать отчет о доходах по клиентам, чтобы точно задокументировать ваши доходы. Узнайте больше здесь.
Какие требования / ограничения существуют для прямых контрактов?
На стороне фрилансера / агентства:
- Если необходимо изменить условия контракта, вы должны отменить и создать новый контракт с обновленными условиями
На стороне клиента:
- Оплата должна быть PayPal или кредитной картой
- Если необходимо изменить условия контракта, фрилансер должен отменить и создать новый контракт с обновленными условиями
- Клиенты не могут инициировать контракт — фрилансер должен
У клиента нет возможности / необходимости создавать учетную запись Upwork с прямыми контрактами.Клиенты могут получить доступ к контракту по электронной почте от Upwork. Если клиент решит создать учетную запись клиента Upwork, новые контракты с этим фрилансером будут облагаться комиссией за услуги фрилансера и комиссией за обработку клиентских платежей.
Могу ли я отправить URL-адрес страницы сведений о контракте в моем браузере непосредственно моему клиенту?
Пожалуйста, не отправляйте своему клиенту URL-адрес страницы с деталями контракта. У вашего клиента нет учетной записи Upwork, поэтому ему нужна специально сгенерированная ссылка, чтобы иметь доступ к информации о контракте.Мы отправим им ссылку на ваш контракт по электронной почте, так что дайте им знать, чтобы они ждали электронного письма от Upwork.com.
Могу ли я заключить прямой контракт с кем угодно в любой точке мира?
Да, прямые контракты доступны для фрилансеров и их клиентов в более чем 180 странах, где мы работаем.
Что произойдет, если клиент откажется от проекта прямых контрактов во время его выполнения?
Если ваш клиент откажется от контракта с вами, все деньги, депонированные на условное депонирование, будут ему возвращены.Если вам нужно оспорить расторгнутый контракт, вы можете связаться с нашей службой поддержки клиентов, чтобы инициировать спор, щелкнув меню «Получить помощь» на странице сведений о контракте.
Могу ли я вернуть свой CL при необходимости? Если да, то можно ли осуществить частичный возврат или полный возврат?
Да, вы можете оформить полный или частичный возврат средств.
Будет ли клиент отправлять отзывы по этому контракту?
Обмен отзывами не предусмотрен для прямых контрактов.
Как мне переключить мои текущие контракты на эту опцию?
Существующие контракты на Upwork не могут быть изменены на контракт прямых контрактов.
Я заключил прямой контракт с клиентом, и теперь мне нужно подтвердить свою личность, чтобы получить оплату. Почему?
Спасибо за вопрос. Мы просим фрилансеров подтвердить свою личность, чтобы обеспечить безопасность своих учетных записей, а также безопасность Upwork. Мы можем попросить вас подтвердить вашу личность в разное время, и это всегда касается безопасности.Мы благодарим вас за то, что вы нашли время пройти через процесс, о котором вы можете узнать больше здесь.
Нужно ли вам подтвердить свою личность, чтобы заключить прямой контракт?
Спасибо за вопрос. Не всегда, однако мы можем связаться с вами и попросить вас подтвердить вашу личность позже. Мы просим фрилансеров подтвердить свою личность, чтобы обеспечить безопасность своих учетных записей, а также безопасность Upwork. Вы можете узнать больше о подтверждении своей личности здесь.
Что такое прямое сообщение?
От каналов до поиска: узнайте, как работает Slack сверху вниз.
NextPrevious
Действия, активность, журналы доступа, специальные возможности, добавить, добавить приложение, добавить участников, добавить в Slack, администраторы, все пароли, аналитика, android, объявление, объявления, каталог приложений, значок приложения, Apple Watch, утверждение приложения, архив, Asana, Atlassian, приложения автоматизации, значок, сведения о выставлении счетов, биллинг, Bitbucket, пользователь-бот, поле, просмотр, звонки, вызовы:, отмена, изменения, каналы, канал мгновенно, управление каналами, уведомление о канале, предложения каналов, домены заявок, закрытие, культура компании, экспорт соответствия, составление, компьютеры, разговоры, преобразование, подключение, подключенные учетные записи, подключение, подключение, копирование сообщений, создание, настройка, настройка, пользовательский SAML, пользовательский, группы поддержки клиентов, экспорт данных, данные безопасность, деактивация, каналы по умолчанию, удаление, удаление, развертывание Slack, рабочий стол, прямые сообщения, каталог, отключение, обнаружение и присоединение, API обнаружения, отображаемое имя, DM, режим «Не беспокоить», домен, домены, понижение версии, Dropbox, дублирующиеся учетные записи, редактировать, редактирование, образование, адрес электронной почты, электронная почта, эмодзи, смайлики, Enterp рост Grid, Enterprise Mobility Management, руководители, экспорт, неудавшиеся платежи, справедливое выставление счетов, часто задаваемые вопросы, поиск, форматирование, форматирование, фреймворк для приложений, бесплатные пробные версии, общие, начало работы, giphy, интеграция с github, организация github, github, глоссарий, google приложения, календарь Google, диск Google, гости, основные моменты, hipchat, человеческие ресурсы, IFTTT, импорт, входящие веб-перехватчики, интеграции, ios, приглашение, ИТ-команды, JIRA, присоединиться, Продолжать, раскладка клавиатуры, сочетания клавиш, доступ к связке ключей, ключевое слово уведомления, язык, языки, оставить, предварительный просмотр ссылок, загрузка, ограничения, ссылки, linux, mac, управление рабочей областью, управление приложениями, управление участниками, маркетинг, упоминание, слияние, действия с сообщениями, отображение сообщений, отображение сообщений, продукты Microsoft, мобильный, мобильный push, перемещение каналов, перемещение рабочих пространств, несколько, отключение звука, имя, имена, шум, некоммерческие организации, уведомление, OneDrive, на борту, владельцы, пароль, оплата, платежи, разрешения, телефоны, PIN-код, план, планы, плюс план, опросы, основное право собственности, политика конфиденциальности, расстановка приоритетов задач, частный, частный канал, личные заметки и файлы, управление проектом элемент, общедоступный канал, цель, быстрое переключение, цитата, реактивация, чтение, набор, информация о реферере, напоминание, удаление, переименование, сохранение, запрос новой рабочей области, роль, роли, RSS, продажи, Salesforce, SAML, SCIM, подготовка SCIM , программа чтения с экрана, поиск, отправка, продолжительность сеанса, совместное использование сообщений, общий доступ, общий канал, общие каналы, боковая панель, вход, выход, режим регистрации, единый вход, Slack Day, Slack для команд, уведомления Slack, сохранение заметок и файлы, соглашения об уровне обслуживания, ServiceNow, подписка, статус резервной копии, slackbot, команды косой черты, фрагмент, отложенный сигнал, разработчики программного обеспечения, звездочка, статистика, шаг, синхронизация, планшеты, налог, темы, часовой пояс, советы, списки дел , тема, каналы сортировки, условия обслуживания, Trello, устранение неполадок, получение неполадок, тур, твиттер, двухфакторная аутентификация, непрочитанные сообщения, обновления, обновление, загрузка, имя пользователя, группы пользователей, URL-адрес, отпуск, поставщик и денежный перевод, видео, голосовой вызов, голос, что есть, что важно, белый список, windows phone, windows, работа в, приложения рабочего пространства, запросы на создание рабочего пространства, обнаружение рабочего пространства, рабочее пространство настройки, wunderlist, ваши действия, Zapier, масштабирование, функции, # общие, хранилище файлов, сообщения, темный режим, тема, Workflow Builder, голос, видео, совместное использование экрана, рабочие процессы, календарь Outlook, приглашенные участники, передача владения, белый список, предприятие Управление ключами, Безопасность транспортного уровня, Надежная аутентификация клиентов, CSV, текстовый файл, часы работы,
Искать «[термин]» См. [N] + другие результаты →
Кто может использовать эту функцию?- Все участники могут начинать и отправлять DM. G uests могут отправлять DM, но они могут начинать их только с людьми, которые находятся в том же канале (ах).
- Бесплатно , Standard , Plus и Enterprise Grid планы
Прямые сообщения (DM) — это небольшие разговоры в Slack, которые происходят вне каналов. Они могут быть индивидуальными или включать до девяти человек. Прямые сообщения хорошо подходят для одноразовых разговоров, которые не требуют взвешивания всего канала людей.
Примечание: Если ваша компания использует Slack Connect, узнайте, как отправлять электронные письма людям за пределами вашей организации.
Настольный
мобильный
- Щелкните All DM в верхней части левой боковой панели. Если вы не видите этот параметр, щелкните Еще , чтобы найти его.
- По умолчанию ваши самые последние разговоры перечислены под заголовком Личные сообщения на левой боковой панели.
Совет: Попробуйте сочетание клавиш ⌘ Shift K (Mac) или Ctrl Shift K (Windows / Linux), чтобы быстро найти или начать разговор в прямом эфире.
- На вкладке Личные сообщения прокрутите все свои Личные сообщения и нажмите одну из списка, чтобы открыть ее.
- Коснитесь поля Перейти к… , чтобы найти чье-то имя и быстро открыть беседу.
Запуск и отправка DM похожа на написание любых других сообщений в Slack. Вы можете использовать кнопку «Создать» , чтобы начать новый разговор, или ввести сообщения в поле сообщения из существующего DM.
Примечание: Вы можете добавить дополнительных людей в прямые переписки с тремя или более людьми, чтобы начать новый разговор.Если вам нужно включить более девяти человек, вы можете вместо этого переместить групповой DM на частный канал.
Отлично!
Большое спасибо за ваш отзыв!
Если вы хотите, чтобы сотрудник нашей службы поддержки ответил вам, отправьте сообщение по адресу [email protected].
Понятно!
Если вы хотите, чтобы сотрудник нашей службы поддержки ответил вам, отправьте сообщение по адресу [email protected].
Если вы хотите, чтобы сотрудник нашей службы поддержки ответил вам, отправьте сообщение по адресу feedback @ slack.com.
Ой! У нас проблемы. Пожалуйста, повторите попытку позже!
Beyond Help: прямые эффекторные функции CD4 + Т-клеток, специфичных для вируса иммунодефицита человека типа 1
РЕЗЮМЕ
Иммунные корреляты защиты при инфекции вирусом иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) остаются плохо определенными, особенно вклад CD4 + Т-клеток. Здесь мы исследуем эффекторные функции ВИЧ-1-специфических CD4 + Т-клеток. Мы демонстрируем ВИЧ-1 p24-специфическую цитолитическую активность CD4 + -Т-клеток в мононуклеарных клетках периферической крови непосредственно ex vivo и после обогащения с помощью антиген-специфической стимуляции.Кроме того, мы показываем, что в редких случаях длительного непроцессора как ВИЧ-1-специфический клон CD4 + -Т-клеток, так и CD4 + Т-клетки непосредственно ex vivo оказывают сильное подавление репликации ВИЧ-1. Подавление репликации вируса зависело от межклеточного контакта между эффекторными Т-клетками CD4 + и клетками-мишенями. Хотя противовирусная эффекторная активность Т-клеток CD8 + хорошо задокументирована, эти результаты убедительно свидетельствуют о том, что ВИЧ-1-специфические Т-клетки CD4 + способны вносить непосредственный вклад в противовирусный иммунитет.
Несмотря на обширные исследования, иммунные корреляты защиты при инфицировании вирусом иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) остаются неопределенными. Контроль репликации ВИЧ-1 в отсутствие антиретровирусной терапии связан с сильными вирус-специфическими иммунными ответами как в субпопуляциях CD8 + -, так и в субпопуляциях CD4 + -Т-клеток у лиц с неопределяемой вирусемией (19, 36). Обычно считается, что вирус-специфические цитотоксические Т-лимфоциты (CTL) CD8 + вносят наибольший вклад в контроль репликации ВИЧ-1.Падение вирусной нагрузки после первичной инфекции ВИЧ-1 временно коррелирует с появлением ЦТЛ, ограниченных классом I главного комплекса гистосовместимости (7, 20). Истощение CD8 + CTL при инфицировании вирусом иммунодефицита обезьян (SIV) приводит к неспособности контролировать первичную виремию или быстрому увеличению вирусной нагрузки при хронической инфекции (37). Однако недавний всесторонний анализ ответов CD8 + -T-клеток не выявил количественной корреляции с виремией (2, 4, 13). Более того, хотя CTL, по-видимому, играют важную роль в инфекции ВИЧ-1, они не обеспечивают защиты от прогрессирования заболевания у большинства людей (10), и виремия обычно сохраняется, несмотря на сильные ВИЧ-1-специфические CD8 + CTL. ответы (рассмотрено в ссылке 25).Эти данные показывают, что в большинстве случаев одних только CTL недостаточно для борьбы с инфекцией.
Растущее количество доказательств указывает на ключевую роль CD4 + -Т-клеточных ответов в ВИЧ-1-инфекции. Устойчивые p24-специфические пролиферативные ответы связаны с временным контролем виремии ВИЧ-1 (36). Однако данные показывают, что высокая вирусная нагрузка препятствует пролиферации Th-клеток и что ВИЧ-1-специфические пролиферативные ответы до прерывания антиретровирусной терапии не позволяют прогнозировать вирусный контроль после прекращения антиретровирусной терапии (26).Считается, что преимущественное инфицирование ВИЧ-1-специфических CD4 + Т-клеток (9) способствует функциональной делеции или нарушению вспомогательной активности, необходимой для поддержки функции CTL, и пролиферативные ответы CD4 + -Т-клеток имеют коррелировали с частотами предшественников CTL (19). Прямые механистические доказательства роли вирус-специфических CD4 + Т-клеток отсутствуют.
Эффекторные функции, опосредованные CD4 + Th-клетками, не были широко исследованы в борьбе с вирусными инфекциями.Цитолитическая активность in vitro субпопуляции CD4 + -Т-клеток наблюдается при ряде вирусных инфекций у людей, в том числе вызванных ВИЧ, вирусом Эпштейна-Барра, вирусом простого герпеса, вирусом кори, вирусом гриппа, ветряной оспой. zoster вирус и вирус денге (см. ссылку 31). Было также показано, что клетки CD4 + Th секретируют противовирусные факторы, такие как гамма-интерферон (IFN-γ) и фактор некроза опухоли альфа (42). Большая часть работ по анализу эффективности CD4 + CTL была выполнена с мышиной системой.Адоптивный перенос опухолеспецифических CTL CD4 + бестимусным мышам или мышам RAG2 — / — приводит к регрессии опухоли после начального роста (29, 45). Клоны CD4 + CTL могут опосредовать подавление вируса Френда in vitro (17) и гриппа in vivo (14). Все эти исследования предполагают потенциальную роль эффекторных функций, опосредованных Th-клетками, в борьбе с вирусными инфекциями.
Настоящее исследование демонстрирует ex vivo-опосредованную цитолитическую активность CD4 + и исследует способность ВИЧ-1-специфичных клонов CD4 + -Т-клеток убивать Т-клетки, экспрессирующие белок p24 ВИЧ-1.Мы также демонстрируем, что CD4 + цитолитических клонов Т-клеток и CD4 + Т-клеток непосредственно ex vivo могут подавлять репликацию ВИЧ-1. Эти данные подтверждают концепцию, что CD4 + Т-клетки не только могут оказывать косвенную «помощь» CTL, но могут играть прямую роль в контроле репликации вируса in vivo.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Субъекты исследования. Клоны CD4 + -Т-клеток были ранее получены от 4 человек (30), и было отобрано еще 10 субъектов, охватывающих диапазон вирусных нагрузок (Таблица 1).Долговременные непрогрессоры определяются как инфицированные ВИЧ-1 более 10 лет и поддерживающие вирусную нагрузку менее 2000 копий РНК / мл плазмы без антиретровирусной терапии. Контроллеры подходят под то же определение, но заражены менее 10 лет. Острые заболевания относятся к лицам, получавшим антиретровирусную терапию в течение шести месяцев после сероконверсии ВИЧ-1, и многие подверглись структурному прерыванию терапии после начальной антиретровирусной терапии. Серонегативные люди не были инфицированы ВИЧ-1, что определено тестированием на антитела к ВИЧ-1.Все образцы для исследования были получены с информированного согласия, и исследования были одобрены Общественным наблюдательным советом Массачусетской больницы общего профиля.
ТАБЛИЦА 1.Характеристики субъектов a
Антигены и моноклональные антитела. Белки p24 и gp120 и контрольные антигены, полученные из бакуловируса, в мг были получены от Protein Sciences (Мериден, Коннектикут), белок обратной транскриптазы был от Trinity Biotech ( Карлсбад, Калифорния), а белок Nef был от ViroGen (Уотертаун, Массачусетс.). Более короткие пептиды p24 получали с помощью пептидного синтезатора Advanced ChemTech (Техас) 396Ω.
Создание клонов и линий. Клоны были получены путем ограничивающего разведения и поддерживались, как описано ранее (32). Линии CD4 + -Т-клеток были созданы с использованием Rosette-Sep (Stem Cell Technologies, Ванкувер, Канада) для истощения клеток CD8 + из крови во время разделения фиколл-гипак с последующей стимуляцией белком p24 (5 мкг / мл). Обогащение CD8 + — или CD4 + -T-клеток выполняли с использованием Rosette-Sep для истощения клеток, несущих клетки CD16, CD19, CD36 или CD56 и CD4 + или CD8 + соответственно.Обогащение CD4 + -Т-клеток обычно приводило к минимуму 85% CD4 + Т-клеток с контаминацией до 7% CD8 + Т-лимфоцитами и 3% CD3 — CD4 — CD8 — ячеек (данные не показаны).
Анализы цитотоксичности. Цитолиз измеряли, как описано ранее (32). Цитолитическую активность мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) оценивали в течение ночи, в то время как клоны и линии Т-клеток анализировали в течение 4 часов. Спонтанный лизис был менее 30%, если не указано иное.Специфический лизис более 10% считался значимым.
ELISPOT-анализ IFN-γ. Иммуноферментный анализ пятен (ELISPOT) выполняли, как описано ранее (32). Клетки-мишени МТ-2 (5 × 10 4 ) и антиген (5 мкг / мл) объединяли с клонами Т-клеток (100 клеток / лунку) в ночном анализе. Фоновые ответы на отсутствие антигена варьировали от 0,5 до 1,5 точек на лунку. Ответы более пяти точек на лунку и пятикратного превышения фонового уровня считались значимыми.
Проточная цитометрия. Окрашивание внутриклеточных цитокинов (ICS) проводили с использованием модификации опубликованных методик (35). Вкратце, 0,5 × 10 6 клеток инкубировали с 5 мкг белка p24 / мл в течение 2 часов, а затем обрабатывали 10 мкг брефельдина A (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури) / мл в течение 4 часов. Поверхность клеток окрашивали анти-CD8-PE, анти-CD3-PerCP и анти-CD4-APC (Becton Dickinson, Сан-Хосе, Калифорния) в течение 30 мин, промывали фосфатно-солевым буфером, а затем фиксировали и пермеабилизировали с использованием Реагенты Caltag (Caltag Laboratories, Burlingame, Calif.). Окрашивание на IFN-γ проводили с использованием изотиоцианата анти-IFN-γ-флуоресцеина в течение 30 мин. Внутриклеточное окрашивание p24 выполняли аналогичным образом в соответствии с инструкциями производителя (Coulter, Майами, Флорида). В некоторых экспериментах клоны сначала метили сукцинимидиловым эфиром диацетата карбоксифлуоресцеина (CFSE) в концентрации 0,05 мкМ в течение 15 минут с последующими двумя промываниями в фосфатно-солевом буфере в соответствии с инструкциями производителя (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон). . Клоны ресуспендировали в RPMI без сыворотки перед окрашиванием CFSE, поскольку сыворотка может подавлять сигнал CFSE.Клетки получали на проточном цитометре FACSCalibur (Becton Dickinson). Контрольные условия включали окрашивание нестимулированных аликвот на IFN-γ и окрашивание контрольными изотипами для p24.
Запасы вирусов. Вирусы были получены, как описано ранее (43). ВИЧ-1 IIIB был первоначально получен в лаборатории Роберта Галло. Запасы вируса получали из супернатанта свежеинфицированных клеток H9 и хранили при -80 ° C. Титр вируса определяли на клетках C8166, как описано ранее (18).
Анализы подавления вируса. Клетки MT-2 центрифугировали и инфицировали ВИЧ-1 при множественности инфекции (MOI) 10 -2 и инкубировали в течение 4 часов при 37 ο C. Клетки-мишени помещали в R10. с 50 ед. интерлейкина 2 (IL-2) (R10-50) / мл в 24-луночных планшетах по 50000 клеток / лунку, и эффекторные клетки добавляли при различных соотношениях эффектор-мишень (E: T), все в дубликат. В экспериментах с трансвелл эффекторные клетки находились в верхней камере на пластинах Costar (мембрана с размером пор 0,4 мкм; Corning, Corning, N.Ю.). Супернатанты собирали через 3, 7 и 10 дней после заражения. Для сбора 0,7 мл было удалено и инактивировано 70 мкл 5% Тритона-100, и 0,7 мл R10-50 было заменено. Супернатанты анализировали на концентрацию p24 с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) в соответствии с инструкциями производителя (Perkin-Elmer Life Sciences, Бостон, Массачусетс).
Анализ супернатанта Th клонов. Клоны (10 6 / мл) стимулировали 5 × 10 5 B-лимфобластоидных клеток (B-LCL) и родственного пептида (5 мкг / мл).Супернатанты собирали через 24, 48 и 72 часа и анализировали с помощью ELISA в соответствии с инструкциями производителя для RANTES, воспалительного белка макрофагов 1α (Mip-1α), Mip-1β, IL-2, IL-4, IL-10, и производство IFN-γ (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота) и α-дефенсинов 1-3 (HyCult Biotechnology, Норвуд, Массачусетс). Цитокины измеряли до и через 24, 48 и 72 ч после стимуляции. Был указан самый высокий из четырех временных точек.
Статистика. Двусторонние значения P были рассчитаны с использованием GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., Сан-Диего, Калифорния). Стандартные отклонения рассчитывали в Excel (Microsoft Corp., Редмонд, Вашингтон), а стандартная ошибка представляла собой стандартное отклонение, деленное на квадратный корень из числа повторных анализов.
РЕЗУЛЬТАТЫ
ВИЧ-1-специфическая CD4 + Цитолитическая активность Т-клеток может быть измерена непосредственно ex vivo. Хотя во многих отчетах описана ВИЧ-специфическая цитолитическая активность CD4 + , опосредованная Т-клетками, относительно небольшая продемонстрировали цитолитическую активность непосредственно ex vivo (21, 28).В большинстве сообщений о цитолитической активности CD4 + -Т-клеток показано уничтожение клетками после нескольких недель культивирования in vitro (11), включая наш предыдущий отчет о p24-специфических клонах CD4 + -Т-клеток (32). Поэтому мы оценили p24-специфические цитолитические ответы CD4 + -Т-клеток ex vivo у 14 ВИЧ-1-инфицированных субъектов с вирусной нагрузкой в диапазоне от неопределяемой до более чем 100000 копий РНК / мл плазмы, включая четырех человек, от которых мы первоначально производные цитолитические клоны, AC-01, AC-25, CTS-01 и 161J (Таблица 2).Четыре ВИЧ-1-серонегативных человека были включены в качестве контроля. Один субъект с длительно непрогрессирующей инфекцией, 161J, проявил цитолитическую активность CD4 + -Т-клеток ex vivo, направленную против пула пептидов, охватывающих белок p24 (фиг. 1a). Цитолитическая активность также была продемонстрирована, когда В-клетки-мишени инкубировались с цельным растворимым белком p24, и она усиливалась при обогащении Т-клетками CD4 + и уменьшалась при обогащении Т-клетками CD8 + (рис.1б). Маловероятно, что естественные клетки-киллеры играли значительную роль в цитотоксической активности, поскольку лизис усиливался после обогащения CD4, процесс, который истощает клетки, экспрессирующие CD16 и CD56. Из обследованных субъектов 161J обладал наибольшей долей CD4 + Т-клеток, которые распознавали белок p24 (рис. 1c и таблица 2). Мы предположили, что низкая частота p24-специфических Th-клеток может затруднять обнаружение цитолитической активности Th-клеток ex vivo. Чтобы решить эту проблему, мы создали линии Т-клеток с использованием PBMC, истощенных по CD8 + , стимулированных белком p24, от ряда субъектов исследования и количественно оценили литическую способность через 2 и 4 недели после выделения (Таблица 2, правые столбцы ).Данные показаны с самого последнего момента времени, доступного для каждой линии Т-клеток; многие строки не дожили до 4-недельного срока. Линии Т-клеток от субъектов AC-25 и LT-04 развивали высокие уровни p24-специфических клеток CD4 + и обладали литической способностью. Линия Т-клеток от субъекта LT-02 генерировала низкие уровни p24-специфической секреции IFN-γ, а также обладала низким уровнем специфической литической способности. CD8 + -Т-клеточные ответы на p24 были незначительными в линиях Т-клеток (данные не показаны).После 5 недель культивирования линия Т-клеток AC-25 ответила на стимуляцию p24 6,47% Т-клеток CD4 + , секретирующих IFN-γ с помощью ICS (фиг. 2). Цитолитический анализ, проведенный на 6 неделе, выявил более 40% специфического лизиса при соотношении Е: Т 50: 1 (рис. 2). Эти данные демонстрируют, что цитолитические CD4 + Т-клетки существуют in vivo, но редко обнаруживаются, возможно, из-за низкой частоты p24-специфических CD4 + Т-клеток у большинства исследованных лиц.
РИС. 1.Ex vivo CD4 + лизис Т-клеток.(а) Способность свежевыделенных PBMC или CD8 + -T-истощенных Т-клеток убивать мишени В-клеток, подвергнутых импульсному воздействию ВИЧ-1 или контрольных белков (обратная транскриптаза, Nef, gp160 и мг) или пептида. пул (p24) тестировали в тесте на уничтожение в течение ночи. Единственным антигеном ВИЧ-1, вызывающим значительный лизис, был пептидный пул, охватывающий p24, и истощение клеток CD8 + увеличивало лизис при данном соотношении E: T. Популяция, обогащенная CD4 + -Т-клетками, составляла 89,1% CD3 + CD4 + клеток и 6.5% CD3 + CD8 + клеток (данные не показаны). E: T отношение указано в легенде каждого рисунка. Спонтанный лизис составлял 33% для B-LCL, полученного в импульсном режиме, и 41% для B-LCL, подвергнутого воздействию импульса p24. Следует отметить, что спонтанный лизис B-LCL с импульсами p24 составил 17% в последующем эксперименте, проанализированном на панели b, и не было изменений в результатах эксперимента. Мы подтвердили цитолитическую активность ex vivo у субъекта 161J в шести отдельных случаях. (b) Обогащение CD4 + или CD8 + Т-клеток и лизис мишеней, пульсируемых целым белком p24.CD4 + относится к РВМС, обогащенным Т-клетками CD4 + во время выделения, а CD8 + относится к РВМС, обогащенным Т-клетками CD8 + . Обогащение CD4 + Т-клеток приводило к усилению лизиса, а обогащение CD8 + Т-клеток приводило к уменьшению лизиса. Популяция, обогащенная CD8 + -Т-клетками, составляла 88,8% CD3 + CD8 + и 3,0% CD3 + CD4 + ; чистоту популяции, обогащенной CD4 + -Т-клетками, не тестировали.(c) Частота встречаемости ВИЧ-1-специфических клеток ex vivo. Свежие PBMC стимулировали указанными целыми белками в концентрации 5 мкг / мл, за исключением p24, где в качестве стимула использовали пул пептидов из 18 аминокислот, охватывающий p24. Клетки окрашивали на продукцию IFN-γ и количественно определяли проточной цитометрией. Было зарегистрировано не менее 50 000 живых событий / условий. Поскольку в качестве стимула для каждого из условий, кроме p24, использовался цельный белок, ожидается, что ответы CD8 + -Т-клеток будут низкими.
РИС. 2.Лизис Т-клеточной линией пациента AC-25. p24-специфический лизис анализировали непосредственно ex vivo и через 42 дня с линией Т-клеток. CD4 + и CD8 + Т-клетки, продуцирующие IFN-γ после стимуляции p24, показаны ex vivo и в трех последующих временных точках. Было собрано / подготовлено не менее 15 000, а в целом более 40 000 живых событий. Лизис был продемонстрирован после того, как уровень p24-специфических CD4 + Т-клеток поднялся выше 6%.
ТАБЛИЦА 2.Лизис ex vivo CD4 + Т-клетками наблюдается лишь изредка a
Лизис Т-клеток-мишеней и распознавание инфицированных CD4 + Т-клеток.Если бы цитолитические Th-клетки влияли на контроль над вирусом, был бы важен лизис мишеней CD4 + -T-клеток. В качестве мишени мы использовали линию клеток МТ-2, иммортализованную вирусом Т-клеточного лейкоза человека типа 1 CD4 + -Т-клеточную линию, способную реплицировать CXCR4-тропный (X4) ВИЧ-1 на высоких уровнях (15). . Мы продемонстрировали, что HLA-подобранный клон (от субъекта 161J), но не несоответствующие клоны, мог распознавать родственный пептид, представленный клетками MT-2 (фиг. 3a). Кроме того, мы показали, что клетки MT-2 были чувствительны к лизису HLA-совместимым клоном Th-клеток (рис.3б). Степень лизиса, наблюдаемая при соотношении E: T, равном 10: 1, была сопоставима со степенью лизиса, наблюдаемой при лизисе B-клеток-мишеней, что подразумевает эффективное распознавание мишени CD4 + -T-клеток. Мы продемонстрировали распознавание инфицированных клеток MT-2 двумя способами, во-первых, путем воздействия на клетки клона 161J инфицированных клеток MT-2 в течение ночи и измерения секреции IFN-γ с помощью ELISPOT (фиг. 3c). Инфицированные клетки были способны индуцировать секрецию IFN-γ, в то время как неинфицированные клетки — нет. Экзогенный антиген добавляли как к инфицированным, так и к неинфицированным клеткам в качестве положительного контроля.Мы также наблюдали продукцию IFN-γ при окрашивании внутриклеточных цитокинов, и клон 161J был активирован присутствием инфицированных, но не неинфицированных клеток MT-2 (74% IFN-γ + клеток по сравнению с 0,6% IFN-γ + клеток. ; данные не показаны). Во второй серии экспериментов мы инфицировали клетки MT-2 ВИЧ-1 IIIB с MOI 0,1 или 1 и тестировали способность клона 161J лизировать инфицированные мишени на 6-й день после заражения. Внутриклеточная экспрессия p24 была выше в клетках МТ-2, инфицированных более высокой дозой вируса (рис.3d), а цитолитическая способность коррелировала с экспрессией p24 (рис. 3e). Эти эксперименты предполагают, что клетки-клоны 161J могут распознавать антиген p24, продуцируемый инфицированными клетками MT-2, и могут лизировать инфицированные клетки.
РИС. 3.Распознавание ВИЧ-1-инфицированных клеток MT-2 с помощью HLA-совместимого клона Th-клеток. (а) Клетки МТ-2 инкубировали со смесью родственных эпитопов для всех пяти клонов Th-клеток. Только HLA-подобранный клон, ограниченный DR4, мог распознавать антиген, представленный клетками MT-2. Знаки «-» и «+» под каждым клоном указывают, соответствует ли клон HLA целевой клетке.Положительные контроли включали стимуляцию аутологичным B-LCL с импульсным воздействием родственного антигена, подтверждающую активность каждого клона (данные не показаны). (b) клон 161J может лизировать клетки MT-2 антиген-специфическим образом. Только HLA-совместимый клон Th-клеток может лизировать клетки MT-2 в 4-часовом анализе высвобождения 51 Cr. Клональная активность была подтверждена параллельно с аутологичными мишенями B-LCL, обработанными родственным антигеном для каждого клона (данные не показаны). (c) Инфицированные клетки MT-2 обрабатывают антиген для распознавания клоном 161J Th-клеток.Инфицированные и неинфицированные клетки использовали в качестве антигенпрезентирующих клеток в ночном анализе ELISPOT на секрецию IFN-γ. Клетки инфицировали при MOI, равном 1. Неинфицированные клетки индуцировали секрецию IFN-γ только в том случае, если был добавлен экзогенный родственный антиген, в то время как инфицированным клеткам не требовался экзогенный антиген для индукции секреции IFN-γ. (d) Гранулярное окрашивание инфицированных клеток МТ-2 на внутриклеточный р24. Тонкая гистограмма представляет неинфицированные клетки, пунктирная гистограмма представляет клетки, инфицированные при MOI, равном 0.1, а гистограмма жирным шрифтом представляет клетки, инфицированные при MOI, равном 1. Средние интенсивности флуоресценции для каждого из условий, соответственно, составляли 19,3, 825 и 1032. (e) Лизис инфицированных клеток MT-2. Клон 161J был способен лизировать инфицированные клетки МТ-2 в 4-часовом анализе высвобождения 51 Cr с большим лизисом в мишенях, экспрессирующих более высокие уровни p24, как определено на фиг. 3d.
Ингибирование репликации ВИЧ-1 ВИЧ-1-специфическими CD4 + Т-клетками. Фратрицид, коммитированный gp120-специфическими CD4 + Т-клетками, был предложен в качестве возможного метода истощения CD4 + Т-клеток наблюдается при прогрессировании до СПИДа (40).Мы выдвинули альтернативную гипотезу, что CD4 + -Т-клетки Цитолитическая активность, специфичная для ВИЧ-1, может лизировать ВИЧ-1-инфицированные CD4 + Т-клетки и подавлять репликацию вируса. Мы проверили эту гипотезу, инфицировав клетки MT-2 и измерив p24, продуцируемый в супернатанте, с добавлением клонов Th-клеток и без них (рис. 4a). Добавление клона 161J привело к сильному подавлению продукции p24 ( P = 0,006). Чтобы проверить, требуется ли контакт между клетками, мы активировали клон 161J свободным антигеном, представленным аутологичным B-LCL, и отделили клон от инфицированных клеток MT-2 в эксперименте с трансвеллером (рис.4а). Несмотря на сильную секрецию IFN-γ клоновыми клетками в трансвеллере (данные не показаны), не было значительного подавления репликации вируса ( P = 0,32). Эти результаты подразумевают, что контакт клетки-клетки необходим для подавления репликации вируса.
РИС. 4.Подавление репликации ВИЧ-1 и секреции противовирусных факторов. (а) Клетки МТ-2 инфицировали ВИЧ-1 IIIB, и супернатант анализировали на продукцию p24 с помощью ELISA на 7 день. Каждый из клонов добавляли в соотношении Е: Т 1: 1.Только клон 161J, соответствующий HLA, был способен подавлять репликацию вируса. Подавление зависело от межклеточного контакта, поскольку отделение клона от мишеней с полупроницаемой мембраной (transwell [TW]) отменяло подавление. Результаты представляют собой средние значения по крайней мере двух независимых экспериментов, а планки погрешностей представляют собой стандартную ошибку. (b) Внутриклеточное окрашивание клеток МТ-2 на р24 на 11 день после инфицирования. Клетки МТ-2 были заблокированы на основании их большого размера и гранулярности в прямом и боковом воротах рассеяния.Тонкая гистограмма представляет неинфицированные клетки, толстая гистограмма представляет инфицированные клетки, а заполненная гистограмма представляет инфицированные клетки, инкубированные с клоном Th-клеток 161J при соотношении E: T 1: 1. Средняя интенсивность флуоресценции для каждого из условий соответственно составляла 27,0, 1670 и 32,3. Было зарегистрировано более 50 000 событий / условий, за исключением только инфицированных клеток, где 22 000 событий были получены из-за более низкого числа жизнеспособных клеток к 11 дню. (C) Подавление репликации ВИЧ-1 161J PBMC непосредственно ex vivo.Инфицированные клетки MT-2 инкубировали с различными соотношениями E: T для 161J PBMC или PBMC, лишенных CD4 + или CD8 + Т-клеток, и p24 определяли количественно с помощью ELISA на 7 день. Вирус подавлялся с помощью PBMC и CD4. Подмножества + -Т-клеток, но не PBMC, лишенные CD4 + Т-клеток. Никакого подавления вируса не было продемонстрировано после совпадения с PBMC от контрольного ВИЧ-1-серонегативного индивидуума. (d) Секреция цитокинов и противовирусных факторов клоном 161J Th-клеток. Клонированные клетки стимулировали родственным антигеном в концентрации 5 мкг / мл, представленным аутологичной линией В-клеток, и супернатанты собирали через 24, 48 и 72 часа.Указано наивысшее значение из трех для каждого цитокина. IL-4, IFN-γ и хемокины CCR5 секретировались на самом высоком уровне.
Одним из объяснений отсутствия продукции p24 в присутствии клона Th могло бы быть устранение неинфицированных клеток MT-2, лишая ВИЧ-1 мишени для репликации. Мы окрашивали клетки MT-2 на внутриклеточный p24 до и после инфицирования ВИЧ-1 и в присутствии клонированных клеток 161J (рис. 4b). Инфицированные клетки MT-2 легко отличить от неинфицированных по окрашиванию p24.Добавление клеток-клонов 161J к инфицированным клеткам MT-2 в нулевой день привело к исчезновению клеток MT-2, экспрессирующих высокие уровни p24, и появлению клеток MT-2 с уровнями внутриклеточного p24, сравнимыми с уровнями в неинфицированных клетках на 11 день. (средняя интенсивность флуоресценции 27,0 против 32,3). Эти данные показывают, что отсутствие продукции p24 было вызвано не отсутствием мишеней MT-2, а скорее снижением репликации вируса в присутствии клона.
Способность клона 161J Th подавлять репликацию ВИЧ-1 может быть приписана эффекторным функциям, полученным клоном после длительного культивирования in vitro.Чтобы решить эту проблему, мы выделили свежие РВМС от субъекта 161J и выселили их непосредственно с инфицированными клетками MT-2 (рис. 4c). PBMC из 161J были способны на пятилогарифмическое подавление продукции p24 при соотношении E: T 10: 1. Эффект отменялся, если CD4 + Т-клетки истощались, и только частично уменьшался при истощении CD8 + Т-клеток. Эти данные не указывают на то, что Т-клетки CD8 + не обладают супрессивным действием против ВИЧ-1, поскольку линия клеток МТ-2 соответствует 16 1J только по одному аллелю C класса I, в то время как она соответствует всем аллелям DR и DQ.Эти данные действительно подразумевают, что подавляющая активность, опосредованная CD4 + -Т-клетками, может быть измерена непосредственно ex vivo и не является артефактом длительного культивирования клеток клона 161J.
Исследование противовирусных растворимых факторов, секретируемых p24-специфическими клонами CD4 + -Т-клеток. Эксперименты с трансвеллером предполагают, что между Th-клоном и клеткой-мишенью необходим межклеточный контакт для подавления репликации вируса (рис. ). Однако возможно, что растворимый фактор по-прежнему отвечает за подавление вируса и что этот фактор может действовать только на близком расстоянии.Поэтому мы охарактеризовали секрецию цитокинов и противовирусных соединений клоном 161J. После стимуляции клон продуцировал уровни IFN-γ и IL-4 более 1000 пг / мл (фиг. 4d). Мы количественно оценили секрецию β-хемокинов, связанную с подавлением репликации CCR5-тропного (R5) вируса, и фактора 1 стромального происхождения, который, как было показано, подавляет инфекцию вирусом X4 (6, 33). Мы также проверили, секретируют ли клоны определяемые количества α-дефензинов, которые, возможно, способствуют подавлению ВИЧ-1, хотя, как было показано, не секретируются Т-клетками (47).Единственными хемокинами или дефенсинами, секретируемыми в значительных количествах, были β-хемокины (фиг. 4d). Эти хемокины обладают активностью против вирусов R5, а не вирусов X4, и было показано, что IFN-γ неактивен против ВИЧ-1 в большинстве систем (24), поэтому кажется, что противовирусный эффект клона Th, который мы наблюдали против вируса X4, был опосредован. посредством прямого цитолиза или неидентифицированного растворимого фактора, неспособного действовать в анализах через лунки.
ОБСУЖДЕНИЕ
Считается, что ВИЧ-1-специфические Th-клетки вносят вклад в борьбу с вирусом, оказывая помощь ВИЧ-1-специфическим CTL и В-клеткам.Здесь мы демонстрируем другую роль Th-клеток — прямое ингибирование репликации ВИЧ-1. Цитолитическая активность, опосредованная Th-клетками, давно известна, хотя ее трудно продемонстрировать без предварительного распространения in vitro. Нам удалось продемонстрировать такую активность непосредственно ex vivo на одном субъекте с высокой частотой встречаемости ВИЧ-1-специфических Th-клеток. Линии Т-клеток от других субъектов обладали ВИЧ-1-специфической цитолитической активностью после кратковременного культивирования in vitro (рис. 2 и таблица 2). Клоны CD4 + -Т-клеток не только были способны лизировать мишени В-клеток, но также могли убивать другие Th-клетки, инфицированные ВИЧ-1.Хотя это могло привести к истощению подмножества Th in vivo, мы также показали, что клон Th обладал активностью по подавлению ВИЧ-1, которая зависела от межклеточного контакта. Подавление не было, вероятно, артефактом длительного культивирования in vitro, поскольку CD4 + Т-клетки ex vivo также обладали подавляющей активностью.
Присутствие цитолитических CD4 + Т-клеток было ранее продемонстрировано при ВИЧ-1-инфекции in vitro. ВИЧ-1-специфические цитолитические клоны CD4 + -Т-клеток можно выделить из спинномозговой жидкости (38), крови (22, 32) и клеток шейки матки (27) ВИЧ-1-инфицированных людей.Цитолитическая активность, опосредованная CD4 + Т-лимфоцитами, непосредственно ex vivo и направленная против белков Gag, Pol или Env, лишь изредка наблюдалась у ВИЧ-1-инфицированных людей (16, 21, 28), хотя характеристика ВИЧ-1-специфических Частота Th-клеток не была одновременно определена количественно. Единственное исследование, посвященное изучению механизма действия цитолитических CD4 + Т-клеток ex vivo, показало, что они действуют, используя неперфорин-зависимые пути (16), в отличие от наших результатов (32; также данные не показаны).CD4 + Т-клетки с цитолитическим фенотипом недавно были идентифицированы ex vivo у ВИЧ-1-инфицированных длительно непрогрессорных и цитомегаловирусных здоровых взрослых, что подразумевает, что цитолитические CD4 + Т-клетки могут встречаться чаще, чем предполагалось ранее. (46). Также было отмечено, что около 20% CD4 + Т-клеток от ВИЧ-1-инфицированных пациентов экспрессируют перфорин, по сравнению с 2% в серонегативном контроле, и что CD4 + Т-клетки от ВИЧ-1-инфицированных людей могут лизировать мишени в методе перенаправленного уничтожения (3).Мы обнаружили только одного ВИЧ-1-инфицированного человека из 14 с обнаруживаемыми цитолитическими Th-клетками ex vivo. Следует отметить, что частота ВИЧ-1-специфических CD4 + Т-клеток у этого субъекта была более чем на порядок выше, чем у других опрошенных субъектов. В поддержку представления о том, что частота эффекторов Th-клеток ограничивает способность обнаруживать ex vivo CD4 + CTL, является тот факт, что линии Т-клеток, размноженные in vitro, могут опосредовать ВИЧ-1-специфический цитолиз, предположительно за счет размножения антиген-специфических Th-клеток. .Хотя мы смогли продемонстрировать ex vivo лизис CD4 + -Т-клеток на одном человеке, эксперименты с Т-клеточными линиями других субъектов предполагают, но не доказывают наличие цитолитической активности in vivo у этих людей, поскольку Th-клетки даже в относительно краткосрочной культуре in vitro показано развитие цитолитической активности (11). Большинство ВИЧ-1-инфицированных людей имеют относительно низкие частоты встречаемости ВИЧ-1-специфических Th-клеток (4), поэтому можно ожидать, что цитолитическая активность Th-клеток ex vivo будет трудно обнаружить для большинства субъектов.Обнаружение значительной доли антиген-специфических цитолитических Th-клеток ex vivo может потребовать исследования вирусов с более высокой частотой встречаемости антиген-специфических Th-клеток, таких как цитомегаловирус (5), или использования более чувствительных методов для обнаружения цитолиза на уровне отдельных клеток. (23, 39). Корреляция между частотой встречаемости антиген-специфических Th-клеток и литической активностью, вероятно, не является абсолютной, и мы наблюдали низкий уровень лизиса в линии Т-клеток от LT-02 субъекта с неопределяемой секрецией IFN-γ (Таблица 2).Также возможно, что люди с высокой вирусной нагрузкой и детектируемой секрецией p24-специфичного IFN-γ не будут обладать цитолитической активностью — вопрос, на который в настоящем исследовании не дан ответ.
Способность Т-клеток убивать В-клетки-мишени интересна, но, чтобы предвидеть роль цитолитической активности Тх-клеток в прямом контроле над ВИЧ-1, сами CD4 + Т-клетки должны быть мишенями лизиса. также. Th-клетки могут представлять эндогенно синтезированный gp160 ВИЧ-1 в CD4 + CTL (34).Наши исследования продемонстрировали, что линия Т-клеток MT-2 может эффективно обрабатывать и представлять эпитоп в p24 Gag и сенсибилизировать себя для лизиса клоном HLA-согласованных Th-клеток. Хотя ВИЧ-1-специфический лизис Th-клеток, по-видимому, опосредуется перфорином аналогично лизису CD8 + -CTL (32), маловероятно, что CD4 + и CD8 + CTL будут иметь те же эффекты in vivo. CD4 + CTL будут нацелены на клетки, которые экспрессируют молекулы класса II главного комплекса гистосовместимости, в первую очередь антигенпрезентирующие клетки и другие Т-клетки.Эти клетки могут представлять пептиды через экзогенный путь после эндоцитоза, не будучи продуктивно инфицированными (40). Если эти клетки являются предпочтительными мишенями для цитолитических Т-лимфоцитов CD4 + , устранение посторонних Th-клеток может способствовать истощению CD4 + -Т-клеток в ВИЧ-1. Кажется маловероятным, что сторонний лизис был основной функцией изученных нами Th-клеток, поскольку полностью элиминировались только клетки MT-2 с высокими уровнями p24 (рис. 4b). Альтернативно, CD4 + CTL могут нацеливаться на резервуары репликации ВИЧ-1, потенциально способствуя контролю над вирусом.
Механически CTL могут ингибировать репликацию ВИЧ-1 in vitro посредством цитолитических и нецитолитических путей (8, 44). Подавление репликации ВИЧ-1, опосредованной Th-клоном, по-видимому, зависит от межклеточного контакта, поскольку отделение клона от клеток-мишеней полупроницаемой мембраной отменяет подавляющий эффект. Умеренное снижение репликации ВИЧ-1 было отмечено при добавлении p24-специфичных клонов Th-клеток к инфицированным Т-лимфобластоидным клеткам CEM человека, и в этих экспериментах клоны Th2 оказались более эффективными, чем клоны Th0 (41).Цитокиновый профиль исследованного нами клона был Th0, с секрецией как IL-4, так и IFN-γ. Дополнительная недавняя работа документально подтвердила подавление вирусов R5 и X4 наивными, неспецифически активированными супернатантами CD4 + -Т-клеток, а подавление X4 опосредовано хемокиновым лигандом 22 (1). Мы не исследовали CCL22, но оказалось, что клон не секретирует какие-либо другие растворимые факторы, связанные с подавлением вирусов X4, включая фактор 1 стромального происхождения и α-дефенсины. Предыдущая работа продемонстрировала секрецию хемокинов, блокирующих R5, Th-клетками (12), что согласуется с растворимыми факторами, которые мы обнаружили в настоящем исследовании.
Таким образом, мы предполагаем, что продемонстрированная выше эффекторная активность Th-клеток может способствовать контролю репликации ВИЧ-1. Одной из причин, по которой эффекторные функции Th-клеток обычно не документируются, является, вероятно, относительно низкая частота ВИЧ-1-специфических Th-клеток при естественной инфекции. Хотя эффекторные реакции Th-клеток сами по себе вряд ли устранят вирус, они могут функционировать как еще одна защита, используемая иммунной системой в ее борьбе за контроль над ВИЧ-1.
БЛАГОДАРНОСТИ
Работа выполнена при поддержке Национальных институтов здравоохранения (гранты AI-01698-01 и AI-040873).D.E.K. был поддержан Швейцарским фондом грантов в области биологии и медицины, die Schweizerische Stiftung für medizinisch-biologische Stipendien (SSMBS.). E.S.R. и P.J.N. были поддержаны Благотворительным фондом Дорис Дьюк. Следующий реагент был получен в рамках программы NIH AIDS Research and Reference Reagent Program, Отдел СПИДа, NIAID, NIH: IL-2, каталожный номер. 136 от Hoffman-La Roche, Inc.
Мы благодарны Брюсу Д. Уокеру за полезные комментарии и вдумчивый обзор рукописи, а также Уолтеру Моретто и Джону Хейтману за квалифицированную техническую помощь.
СНОСКИ
- Получено 19 февраля 2004 г.
- Принято 13 апреля 2004 г.
- Авторское право © 2004 Американское общество микробиологии
СПРАВОЧНИКИ
- 1.000
, Ф. Кокки, К. К. Бэгли, Р. Камин-Льюис, Р. К. Галло, А. ДеВико и Г. К. Льюис. 2003. Факторы, подавляющие ВИЧ-1, секретируются CD4 + Т-клетками во время первичных иммунных ответов. Proc. Natl. Акад. Sci. USA100 : 15006-15010.
- 2.↵
Аддо, MM, XG Yu, A. Rathod, D. Cohen, RL Eldridge, D. Strick, MN Johnston, C. Corcoran, AG Wurcel, CA Fitzpatrick, ME Feeney, WR Rodriguez , Н. Басгоз, Р. Дренерт, Д. Р. Стоун, К. Брандер, П. Дж. Гоулдер, Е. С. Розенберг, М. Альтфельд и Б. Д. Уокер. 2003. Комплексный анализ эпитопа Т-клеточных ответов, специфичных для вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1), направленных против всего экспрессированного генома ВИЧ-1, демонстрирует широко направленные ответы, но не корреляцию с вирусной нагрузкой.J. Virol. 77 : 2081-2092.
- 3.↵
Appay, V., JJ Zaunders, L. Papagno, J. Sutton, A. Jaramillo, A. Waters, P. Easterbrook, P. Gray, D. Smith, AJ McMichael, DA Купер, С.Л. Роуленд-Джонс и А.Д. Келлехер. 2002. Характеристика CD4 (+) CTL ex vivo. J. Immunol. 168 : 5954-5958.
- 4.↵
Беттс, М. Р., Д. Р. Амброзак, Д. К. Дуэк, С. Бонхёффер, Дж. М. Бренчли, Дж. П. Казацца, Р.А. Куп и Л. Дж. Пикер. 2001. Анализ Т-клеточных ответов CD4 (+) и CD8 (+), специфичных к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1): взаимосвязь с вирусной нагрузкой при нелеченой инфекции ВИЧ-1. J. Virol. 75, : , 11983-11991.
- 5.↵
Bitmansour, A. D., S. L. Waldrop, C. J. Pitcher, E. Khatamzas, F. Kern, V. C. Maino и L. J. Picker. 2001. Клонотипическая структура ответа CD4 + Т-клеток памяти человека на цитомегаловирус. J. Immunol. 167 : 1151-1163.
- 6.
Блеул, К. К., М. Фарзан, Х. Чоу, К. Паролин, И. Кларк-Льюис, Дж. Содроски и Т. А. Спрингер. 1996. Хемоаттрактант лимфоцитов SDF-1 является лигандом для LESTR / фузина и блокирует проникновение ВИЧ-1. Nature382 : 829-833.
- 7.↵
Заем, П., Х. Левицки, Б. Х. Хан, Г. М. Шоу и М. Б. Олдстон. 1994. Вирус-специфическая активность цитотоксических Т-лимфоцитов CD8 +, связанная с контролем виремии при первичной инфекции вируса иммунодефицита человека 1 типа.J. Virol.68 : 6103-6110.
- 8.↵
Кокки, Ф., А. Л. ДеВико, А. Гарзино-Демо, С. К. Арья, Р. К. Галло и П. Луссо. 1995. Идентификация RANTES, MIP-1 альфа и MIP-1 бета как основных факторов, подавляющих ВИЧ-1, продуцируемых CD8 + Т-клетками. Science270 : 1811-1815.
- 9.↵
Douek, D., J. Brenchley, M. Betts, D. Ambrozak, B. Hill, Y. Okamoto, J. Casazza, J. Kuruppu, K. Kunstman, S. Wolinsky , З.Гроссман, М. Дибул, А. Оксениус, Д. Прайс, М. Коннорс и Р. Куп. 2002. ВИЧ-1 преимущественно инфицирует ВИЧ-1-специфические CD4 + Т-клетки. Nature417 : 95-98.
- 10.↵
Draenert, R., CL Verrill, Y. Tang, TM Allen, AG Wurcel, M. Boczanowski, A. Lechner, AY Kim, T. Suscovich, NV Brown, MM Addo, and Б. Д. Уокер. 2004. Устойчивое распознавание аутологичного вируса высокоавидными Т-лимфоцитами CD8 при хронической прогрессирующей инфекции вируса иммунодефицита человека типа 1.J. Virol. 78, : , 630-641.
- 11.↵
Fleischer, B. 1984. Приобретение специфической цитотоксической активности Т4 + Т-лимфоцитами человека в культуре. Nature308 : 365-367.
- 12.↵
Furci, L., G. Scarlatti, S. Burastero, G. Tambussi, C. Colognesi, C. Quillent, R. Longhi, P. Loverro, B. Borgonovo, D. Gaffi , Э. Кэрроу, М. Малнати, П. Луссо, А.Г. Сиккарди, А. Лаззарин и А. Беретта. 1997. Опосредованное антигеном C-C хемокин-опосредованное подавление ВИЧ-1 с помощью CD4 (+) Т-клеток от облученных неинфицированных индивидуумов, экспрессирующих аллель CCR-5 дикого типа.J. Exp. Мед. 186 : 455-460.
- 13.↵
Gea-Banacloche, JC, SA Migueles, L. Martino, WL Shupert, AC McNeil, MS Sabbaghian, L. Ehler, C. Prussin, R. Stevens, L. Lambert, J. Альтман, К. В. Халлахан, Д. К. Дек Уирос и М. Коннорс. 2000. Поддержание большого количества вирус-специфических CD8 + Т-клеток у ВИЧ-1-инфицированных прогрессоров и длительно непрогрессоров. J. Immunol. 165 : 1082-1092.
- 14.↵
Грэм, М.Б., В. Л. Брасиале и Т. Дж. Брасиале. 1994. Специфические для вируса гриппа CD4 + Т-хелперные Т-лимфоциты 2 типа не способствуют выздоровлению после экспериментальной вирусной инфекции. J. Exp. Мед. 180 : 1273-1282.
- 15.↵
Харада, С., Я. Коянаги и Н. Ямамото. 1985. Инфекция HTLV-III / LAV в HTLV-I-несущих клетках MT-2 и MT-4 и применение в анализе бляшек. Наука 229 : 563-566.
- 16.↵
Хейнкелейн, М., И. Эйлер-Кониг, Х. Клинкер, Х. Ракл-Ланц и К. Джассой. 1996. Лизис антиген-экспрессирующих клеток вируса иммунодефицита человека типа 1 CD4 и CD8 T-клетками ex vivo. J. Infect. Дис. 174 : 209-213.
- 17.
Иваширо, М., К. Петерсон, Р. Дж. Мессер, И. М. Стромнес и К. Дж. Хасенкруг. 2001. CD4 (+) Т-клетки и гамма-интерферон в долгосрочном контроле стойкой дружественной ретровирусной инфекции. J. Virol. 75, : , 52-60.
- 18.↵
Johnson, V.A., and B.D. Walker. 1990. Анализ слияния ВИЧ-1-инфицированных клеток, стр. 92-94. В А. Алдовани и Б. Д. Уокер (ред.), Методы исследования ВИЧ-1. Stockton Press, Нью-Йорк, Нью-Йорк,
- 19.000
Каламс, С. А., С. П. Бухбиндер, Э. С. Розенберг, Дж. М. Биллингсли, Д. С. Колберт, Н. Г. Джонс, А. К. Ши, А. К. Троча и Б. Д. Уокер. 1999. Связь между вирус-специфическими цитотоксическими Т-лимфоцитами и ответами помощников при инфицировании вирусом иммунодефицита человека 1 типа.J. Virol.73 : 6715-6720.
- 20.↵
Куп, Р. А., Дж. Т. Сафрит, Ю. Цао, К. А. Эндрюс, Г. Маклеод, В. Борковски, К. Фартинг и Д. Д. Хо. 1994. Временная ассоциация клеточных иммунных ответов с начальным контролем виремии при синдроме первичного вируса иммунодефицита человека 1 типа. J. Virol. 68, : , 4650-4655.
- 21.↵
Кунду, С. К., и Т. К. Мериган. 1992. Эквивалентное распознавание белков ВИЧ-1, Env, Gag и Pol, цитотоксическими Т-лимфоцитами CD4 + и CD8 +.AIDS6 : 643-649. (Erratum, AIDS 6: после 1051.)
- 22.↵
Литтауа, Р. А., М. Б. Олдстон, А. Такеда и Ф. А. Эннис. 1992. Клон цитотоксических Т-лимфоцитов CD4 + к консервативному эпитопу р24 вируса иммунодефицита человека типа 1: цитотоксическая активность и секреция интерлейкина-2 и интерлейкина-6. J. Virol. 66, : , 608-611.
- 23.↵
Лю, Л., А. Чахруди, Г.Сильвестри, М. Э. Вернетт, В. Дж. Кайзер, Дж. Т. Сафрит, А. Комория, Дж. Д. Альтман, Б. З. Паккард и М. Б. Файнберг. 2002. Визуализация и количественная оценка цитотоксичности, опосредованной Т-клетками, с использованием проницаемых для клеток субстратов флуорогенных каспаз. Nat. Мед.8 : 185-189.
- 24.↵
Мацкевич, К. Э., Х. Ортега и Дж. А. Леви. 1994. Влияние цитокинов на репликацию ВИЧ-1 в лимфоцитах CD4 +: отсутствие идентичности с противовирусным фактором клеток CD8 +.Cell Immunol. 153 : 329-343.
- 25.↵
Мак-Майкл, А. Дж. И С. Л. Роуленд-Джонс. 2001. Клеточные иммунные ответы на ВИЧ-1. Nature410 : 980-987.
- 26.↵
McNeil, A. C., W. L. Shupert, C. A. Iyasere, C. W. Hallahan, J. Mican, R. T. Davey, Jr., and M. Connors. 2001. Высокий уровень виремии ВИЧ-1 подавляет вирусную антиген-специфическую пролиферацию CD4 + Т-клеток. Proc. Natl. Акад. Sci. USA98 : 13878-13883.
- 27.↵
Musey, L., Y. Hu, L. Eckert, M. Christensen, T. Karchmer и M. J. McElrath. 1997. ВИЧ-1 индуцирует цитотоксические Т-лимфоциты в шейке матки инфицированных женщин. J. Exp. Мед.185 : 293-303.
- 28.↵
Musey, L., J. Hughes, T. Schacker, T. Shea, L. Corey и M. J. McElrath. 1997. Ответы цитотоксических Т-клеток, вирусная нагрузка и прогрессирование заболевания при ранней инфекции вируса иммунодефицита человека 1 типа.N. Engl. J. Med. 337 : 1267-1274.
- 29.↵
Nishimura, T., K. Iwakabe, M. Sekimoto, Y. Ohmi, T. Yahata, M. Nakui, T. Sato, S. Habu, H. Tashiro, M. Sato , и А. Охта. 1999. Отчетливая роль антиген-специфических Т-хелперов типа 1 (Th2) и Th3 клеток в искоренении опухоли in vivo. J. Exp. Мед. 190 : 617-627.
- 30.↵
Норрис, П. Дж., Х. Ф. Моффет, К. Брандер, Т. М. Аллен, К. М. О’Салливан, Л.А.Козими, Д. Э. Кауфманн, Б. Д. Уокер и Э. С. Розенберг. 2004. Тонкая специфичность и перекрестная реактивность Gag-специфических CD4 + Т-клеток ВИЧ-1 типа 1. AIDS Res. Гул. Retrovir.20 : 315-325.
- 31.↵
Norris, P. J., and E. S. Rosenberg. 2002. CD4 (+) Т-хелперные клетки и роль, которую они играют в контроле над вирусами. J. Mol. Мед.80 : 397-405.
- 32.↵
Норрис, П. Дж., М. Сумарока, К. Брандер, Х.Ф. Моффет, С. Л. Босуэлл, Т. Нгуен, Ю. Сыкулев, Б. Д. Уокер и Э. С. Розенберг. 2001. Множественные эффекторные функции, опосредованные специфическими клонами CD4 + Т-клеток вируса иммунодефицита человека. J. Virol. 75, : 9771-9779.
- 33.↵
Оберлин, Э., А. Амара, Ф. Бачелери, К. Бессия, Дж. Л. Вирелизье, Ф. Аренцана-Сейсдедос, О. Шварц, Дж. М. Херд, И. Кларк-Льюис, Д. Ф. Леглер, М. Лётчер, М. Баггиолини и Б. Мозер. 1996 г.Хемокин CXC SDF-1 является лигандом для LESTR / фузина и предотвращает инфицирование ВИЧ-1, адаптированным к Т-клеточной линии. Nature382 : 833-835.
- 34.↵
Орентас, Р. Дж., Дж. Э. Хилдрет, Э. Обах, М. Полидефкис, Г. Э. Смит, М. Л. Клементс и Р. Ф. Силичиано. 1990. Индукция CD4 + цитолитических Т-клеток человека, специфичных для ВИЧ-1-инфицированных клеток, с помощью субъединичной вакцины gp160. Science248 : 1234-1237.
- 35.↵
Кувшин, К.Дж., К. Куиттнер, Д. М. Петерсон, М. Коннорс, Р. А. Куп, В. К. Майно и Л. Дж. Пикер. 1999. ВИЧ-1-специфические CD4 + Т-клетки обнаруживаются у большинства людей с активной инфекцией ВИЧ-1, но их количество уменьшается при длительном подавлении вируса. Nat. Мед. 5 : 518-525.
- 36.↵
Розенберг, Э. С., Дж. М. Биллингсли, А. М. Калиендо, С. Л. Босуэлл, П. Э. Сакс, С. А. Каламс и Б. Д. Уокер. 1997. Энергичные ВИЧ-1-специфические CD4 + Т-клеточные ответы, связанные с контролем виремии.Science278 : 1447-1450.
- 37.↵
Schmitz, JE, MJ Kuroda, S. Santra, VG Sasseville, MA Simon, MA Lifton, P. Racz, K. Tenner-Racz, M. Dalesandro, BJ Scallon, J. Ghrayeb , М. А. Форман, Д. К. Монтефиори, Е. П. Рибер, Н. Л. Летвин и К. А. Рейман. 1999. Контроль виремии при инфицировании вирусом иммунодефицита обезьян CD8 + лимфоцитами. Science283 : 857-860.
- 38.↵
Сетхи, К.К., Х. Нахер и И. Стрёманн. 1988. Фенотипическая гетерогенность полученных из спинномозговой жидкости ВИЧ-1-специфических и HLA-рестриктированных клонов цитотоксических Т-клеток. Nature335 : 178-181.
- 39.↵
Шихи, М. Э., А. Б. Макдермотт, С. Н. Фурлан, П. Кленерман и Д. Ф. Никсон. 2001. Новый метод флуорометрической оценки антиген-специфического лизиса Т-лимфоцитов. J. Immunol. Методы 249 : 99-110.
- 40.№
Силичиано, Р. Ф., Т. Лоутон, К. Кнолл, Р. В. Карр, П. Берман, Т. Грегори и Э. Л. Рейнхерц. 1988. Анализ взаимодействий вируса-хозяина при СПИДе с клонами Т-клеток против gp120: влияние вариации последовательности ВИЧ-1 и механизм истощения CD4 + клеток. Cell54 : 561-575.
- 41.↵
Вьякарнам А., П. М. Матеар, С. Дж. Мартин и М. Вагстафф. 1995. Клетки Th2, специфичные для ВИЧ-1 gag p24, менее эффективны, чем клетки Th0, в поддержке репликации ВИЧ-1 и ингибируют репликацию вируса в клетках Th0.Иммунология 86 : 85-96.
- 42.
Уолдроп, С. Л., К. Дж. Питчер, Д. М. Петерсон, В. К. Майно и Л. Дж. Пикер. 1997. Определение частот антиген-специфической памяти / эффекторных CD4 + Т-клеток с помощью проточной цитометрии: доказательства нового антиген-специфического гомеостатического механизма при иммунодефиците, ассоциированном с ВИЧ-1. J. Clin. Исследование 99 : 1739-1750.
- 43.↵
Ян, О. О., С. А. Каламс, М. Розенцвейг, А.Троха, Н. Джонс, М. Козил, Б. Д. Уокер и Р. П. Джонсон. 1996. Эффективный лизис цитотоксических Т-лимфоцитов клеток, инфицированных вирусом иммунодефицита человека 1 типа. J. Virol.70 : 5799-5806.
- 44.↵
Янг, О. О., С. А. Каламс, А. Троча, Х. Цао, А. Ластер, Р. П. Джонсон и Б. Д. Уокер. 1997. Подавление репликации вируса иммунодефицита человека типа 1 клетками CD8 +: свидетельства ограниченного HLA класса I запуска цитолитических и нецитолитических механизмов.J. Virol.71 : 3120-3128.
- 45.↵
Йошимура, А., Х. Шику и Э. Накаяма. 1993. Отторжение линии IA + варианта лейкемии FBL-3 цитотоксическими Т-лимфоцитами с фенотипами CD4 + и CD4-CD8-Т-клеточного рецептора-альфа-бета, генерированными у мышей C57BL / 6, лишенных CD8. J. Immunol.150 : 4900-4910.
- 46.↵
Заундерс, Дж. Дж., В. Б. Дайер, Б. Ван, М. Л. Мунье, М. Миранда-Саксена, Р. Ньютон, Дж.Мур, К. Р. Маккей, Д. А. Купер, Н. К. Саксена и А. Д. Келлехер. 2004. Идентификация циркулирующих антиген-специфических CD4 + Т-лимфоцитов с CCR5 +, цитотоксическим фенотипом у ВИЧ-1, не являющегося долгосрочным непрогрессором, и у ЦМВ-инфекции.